人体呼出气体冷凝液中醛类肺癌代谢物的分析测定

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肺癌是当前最常见和最难治愈的恶性肿瘤。近年来,呼出气体冷凝液(EBC)中生物标记物的分析已经引起了科研人员的广泛关注。与传统侵入式的检测手段相比,呼出气体冷凝液的采样方式是非侵入式的,不仅采样过程简单,而且对病人造成的压力也相对较小。分子标记物能为病情诊断提供预先征兆,在各种疾病的早期诊断中发挥着越来越重要的作用。然而呼出气体冷凝液的分析面临几个难题:呼出气体冷凝液中生物标记物的浓度较低;复杂基质干扰目标物的测定;每次采样所得实际样品的体积较小。因此,我们需要建立可靠的方法对实际样品进行纯化和预富集,与灵敏度较高的分析仪器联用来分析检测呼出气体冷凝液中的生物标记物。近年来,固相萃取技术(SPE)广泛地用于样品前处理方法中,该萃取方法是利用目标物在吸附剂和有机溶剂之间的分配平衡进行萃取和富集。固相萃取与分析技术的在线联用,实现了上样、富集、洗脱、检测一系列实验过程的连续分析,不仅减少了实际样品的使用量,还具有操作简单、分析速度快、有机溶剂的使用量小、环境污染小、重现性好等优点。本课题探索并采用基于两种新型吸附材料的固相萃取法,将其与高效液相色谱技术联用,对呼出气体冷凝液中的醛类标记物进行检测。本文的主要研究内容如下:1、建立了一种在线固相萃取与高效液相色谱联用的分析方法,对人体呼出气体冷凝液中的醛类物质进行测定。将200μL的呼出气体冷凝液和衍生化试剂2,4-DNPH直接上样,衍生化产物吸附于固相萃取小柱上,解析液直接进入液相色谱分析。同时,实验优化了衍生化反应条件、洗脱剂种类和体积等实验条件。在最优的实验条件下,采用在线固相萃取结合高效液相色谱法测定了15个肺癌病人、5个肺炎病人和10个正常人的呼出气体冷凝液中的丁醛、戊醛、己醛、庚醛、辛醛、壬醛的含量,方法的回收率在96%-113%之间,结果令人满意。2、建立了基于负载多壁碳纳米管担体的固相萃取法,结合高效液相色谱法,测定人体呼出气体冷凝液中的醛类物质。实验将多壁碳纳米管负载于白色担体101上,将此固相萃取材料用于样品前处理。同时,实验优化了一系列衍生化反应条件和固相萃取条件,并将其应用于人体呼出气体冷凝液的分析检测。该方法具有萃取效率高、检测限较低、重现性好、成本低廉、有机溶剂用量少等优点,特别是改善了多壁碳纳米管作为固相萃取材料所导致背压较高的缺点。六种醛在0.005-2μmol L-1范围内的线性良好,回归系数r均大于0.996。
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