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本研究采用黑熊耳部成纤维细胞做为核供体,延边黄牛卵母细胞做为受体,在基础培养中加入不同浓度的牛磺酸,谷氨酰胺,谷氨酸,精氨酸,脯氨酸,甘氨酸比较观察异种重构胚的胚胎发育情况,确定对异种重构胚体外发育起到积极作用的最佳浓度。 试验结果: 1.本实验在基础培养液中添加7.0mmol/L、14.0mmol/L、21.0mmol/L三组不同浓度的牛磺酸和一组未添加牛磺酸的对照组对比异种重构胚的发育率,结果显示培养液中牛磺酸浓度为7.0mmol/L的囊胚发育率最高为7.52%与其他组差异显著,卵裂率和8-16细胞发育率没有明显差异。 2.本实验在基础培养液中添加0.5mmol/L、1.0mmol/L、2.0mmol/L三组不同浓度的谷氨酰胺和一组未添加谷氨酰胺的对照组对比异种重构胚的发育率,结果显示培养液中谷氨酰胺浓度为0.5 mmol/L时8-16细胞发育率31.26%较其他三组差异明显,囊胚发育率最高为5.27%与其他组差异显著,卵裂率没有明显差异。 3.本实验在基础培养液中添加3.2mmol/L、6.4mmol/L、12.8mmol/L三组不同浓度的谷氨酸和一组未添加谷氨酸的对照组对比异种重构胚的发育率,结果显示培养液中谷氨酸浓度为6.4mmol/L的囊胚发育率最高为6.51%与其他组差异显著,卵裂率和8-16细胞发育率没有明显差异。 4.本实验在基础培养液中添加0.061mmol/L、0.132mmol/L、0.264mmol/L三组不同浓度的精氨酸和一组未添加精氨酸的对照组对比异种重构胚的发育率,结果显示培养液中精氨酸浓度为0.061mmol/L的囊胚发育率最高为7.34%与其他组差异显著,卵裂率和8-16细胞发育率没有明显差异。 5.本实验在基础培养液中添加0.143mmol/L、0.285mmol/L、0.570mmol/L三组不同浓度的脯氨酸和一组未添加脯氨酸的对照组对比异种重构胚的发育率,结果显示培养液中脯氨酸浓度为0.143mmol/L的囊胚发育率最高为5.62%与其他组差异显著,卵裂率和8-16细胞发育率没有明显差异。 6.本实验在基础培养液中添加7mmol/L、14mmol/L、21mmol/L三组不同浓度的甘氨酸和一组未添加牛磺酸的对照组对比异种重构胚的发育率,结果显示培养液中牛磺酸浓度为14mmol/L的囊胚发育率最高为5.73%与其他组差异显著,卵裂率和8-16细胞发育率没有明显差异。 7.不同种氨基酸最佳浓度进行比较研究发现牛磺酸和谷氨酰胺的最佳浓度组囊胚发育率(7.29%、6.87%)高于其他氨基酸组,差异显著。