GDNF对培养的背根神经节神经元P物质释放的影响及作用机制

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoqing123456789
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF)是转化生长因子-β家族的成员,被认为是一种在体内有广泛表达并且作用复杂的多效能神经营养因子,目前已知在离体培养的情况下,GDNF对周围神经系统许多部分神经元具有明显的营养活性。 GDNF对受刺激或损伤的背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元结构及功能的可塑性具有影响,GDNF能够介导DRG神经元的细胞内事件,如神经元突起内线粒体的运输或聚集以及细胞内钙离子浓度的变化等。但GDNF对正常DRG神经元有没有特异性作用尚不清楚。 辣椒素可以激活感觉神经元而引起痛觉,并呈剂量相关性地释放P物质(substance P,SP)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)等神经肽类物质和兴奋性氨基酸。辣椒素受体(vanilloid receptor,VR1),广泛分布于DRG神经元上,可被多种伤害刺激激活,是伤害性感受器的兴奋因子。 SP是一种兴奋性神经递质,分布于中枢和外周神经系统。SP在DRG小型神经元胞体合成后,经快速轴浆运输至中枢端及外周端,而神经递质释放量的多少反映了神经元的功能状态,神经递质的表达与神经元的功能状态有关,其释放量的多少反映了神经元的功能状态。小剂量应用辣椒素可兴奋感觉神经末梢,并引起感觉神经递质的释放,但是GDNF对培养的DRG神经元功能状态,如神经递质SP的释放的影响作用目前尚不清楚。 基于以上研究背景,本研究将原代分散培养的胎鼠DRG神经元施加不同浓度GDNF,探测GDNF对培养的胎鼠DRG神经元中SP释放的影响作用。将胎龄为15d的Wistar胎鼠DRG神经元分散培养,观察有GDNF(5ng/ml,10ng/ml,50ng/ml)和没有GDNF孵育的神经元的活细胞生长状况,用微管相关蛋白2(mierotubule associated protein 2,MAP2)和4,6二脒基-2-苯吲哚(4,6-Diamidino-2-phenylindole,DAPI)双染DRG神经元,计数神经元数目,并用放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)检测辣椒素孵育前、后SP的释放,用Western blot分析SP和VR1的表达。根据以上各项检测结果综合分析GDNF对DRG神经元SP释放的影响作用及其机制。 实验结果如下: (1)各组DRG神经元倒置相差显微镜动态观察结果:正常培养的DRG神经元呈单层散在分布,由单个神经元发出的突起相互交织成网状;用GDNF孵育的神经元用GDNF孵育的神经元生长状况良好。 (2)MAP2和DAPI荧光双染:可见MAP2标记的神经元和DAPI标记的细胞核,随着GDNF孵育浓度的增加神经元胞体更加密集。 (3)神经元计数结果:用GDNF孵育的标本,单位视野内神经元的数目明显增加,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。 (4)SP释放量检测结果:用GDNF孵育的标本,SP的基础释放量和由辣椒素刺激后诱发的SP释放量均较对照组显著性增加,而且由辣椒素刺激后诱发的SP释放量增加的幅度明显高于SP基础释放量增加的幅度。由辣椒素刺激后诱发的SP释放量与GDNF呈剂量依赖关系。 (5)Western blot分析SP表达的结果:与对照组相比,GDNF孵育的标本,SP表达量增加。 (6)Western blot分析VR1表达的结果:与对照组相比,GDNF孵育的标本,VR1表达量增加。 以上结果提示:GDNF可促进培养的胎鼠DRG神经元的存活,能促进培养中DRG神经元神经递质SP的表达及增加SP的基础释放量,并能增加辣椒素诱发神经递质SP释放的敏感性。
其他文献
实验目的:本课题旨在研究充血性心力衰竭中,用PDTC(核转录因子NF-κB的拮抗剂)干预处理后,在中枢脑组织中炎性细胞因子TNF-a表达情况是否受到影响,以探讨抑制中枢核转录因子N
本实验室前期从西藏Kefir粒中分离得到一株具有高产胞外多糖的马奶酒样乳杆菌ZW3,该菌具有良好的益生功能,在优化的改良MRS培养基中,胞外多糖最高产量达2000mg/L以上,产生的胞外
传统的微生物纯培养技术能够分离得到的微生物仅为自然界中微生物总数的1%左右,绝大多数微生物还处于未培养和未研究状态,针对新型培养技术的探索已经成为了研究热点。本论文
本研究对广州市番禺、康乐和赤岗三地种植的对青枯病抗性的番茄品种益丰、敏感品种益农101的健康和枯萎植株、中抗品种夏红的内生放线菌进行分离、鉴定,并对内生菌分离物产铁
本文通过对荣华二采区10
期刊
我国是一个森林资源贫乏的国家,木材商品供求矛盾十分突出,森林生态服务功能难以满足国土生态安全的需要。遵循森林分类经营原则,利用较少的林地资源,采取集约经营措施,最大限度地
G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptors,GPCRs)是一类具有七次跨膜α螺旋的蛋白超家族,下游信号分子是异源三聚体的 G蛋白,也是最大的蛋白受体超家族之一。GPCRs是一类非常重
为了揭示快慢羽速度差异形成的秘密,寻找控制羽毛发育的基因,本研究选择Bmp2,Shh基因分析在出壳一天快慢羽鸡中翼羽皮肤和翼羽毛囊中的表达情况,来研究这两个基因与羽速性状的相
在不同配型的单倍体AS7和AS21中,利用LHF-PCR(Long homology flanking-PCR)将醛糖还原酶基因gre3缺失,并引入栖瘤胃真菌Piromyces sp. E2的木糖异构酶基因(xylA)和树干毕赤酵母(Pi