Burkholderia cepacia JA38菌株发酵工艺优化及对人参锈腐病菌生防作用研究

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本试验以从人参根际土壤中分离得到的一株生防菌JA38为对象,鉴定了其种类,优化了发酵工艺,确定了菌株对人参锈腐病菌(Ilyonectria robusta)的拮抗作用和对人参锈腐病的生防作用。结果如下:1.平板对峙试验表明生防菌JA38对人参根部7种主要的真菌病害都具有良好的拮抗效果。通过形态学鉴定,生理生化特性鉴定,16Sr DNA序列对比确定了生防菌JA38为伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。2.采用响应面法对生防菌JA38的发酵工艺进行优化,最适培养基的配方为:葡萄糖6.8%;酵母浸粉1.13%;氯化钠0.7%;硫酸镁0.06%。最适培养条件为:温度37℃、初始p H 8、接种量6%、转速150 rpm、培养时间30 h。之后采用5 L和30 L发酵罐放大方式,探究生防菌JA38的发酵罐发酵条件,30 L发酵罐的发酵工艺为发酵温度37℃、转速150 rpm,通气量35.0 L/min,罐压维持0.03 Mpa-0.05 Mpa,发酵过程中罐内的p H值维持在6.9-7.1之间,放罐时间为36 h,此时罐中活菌数为2.323×1010 cfu/m L,较发酵工艺优化前的3×108cfu/m L提高了76.43倍。3.采用生长速率法,菌丝生物量测定法,孢子萌发法,显微观察法,室内离体接种法测定了生防菌JA38对人参锈腐病菌的拮抗作用。当生防菌JA38浓度为1×109 cfu/m L时对菌丝生长的抑制率为100%,EC50是1.4×106 cfu/m L,毒力回归方程为y=0.917x+0.2,对人参锈腐病菌孢子萌发的抑制率为92.52%。当生防菌JA38的浓度在1×104 cfu/m L时对人参锈腐病菌孢子产生的抑制率为100%。光学显微镜观察发现经生防菌JA38处理后的菌丝发生了严重的断裂,顶端有分泌物,菌丝分支增多。扫描电镜观察发现经生防菌JA38处理后菌丝顶端出现凹陷,且菌丝表面出现褶皱开裂的情况,菌丝的表面附着有大量的细菌。室内离体接种实验表明生防菌JA38对人参锈腐病有良好的抑制效果。4.通过灌根法对4年生的健康人参进行处理,对采集回的样品进行定殖回收试验,生防相关基因表达量的测定,土壤酶活力的测定以及土壤根际微生物的测定。结果显示,生防菌JA38可在根部及土壤中稳定定殖30 d,根部5种植物防御酶基因的表达量均为上调,土壤中3种促生酶活力均上升,生防菌JA38可以明显降低土壤中真菌的数量且对细菌和放线菌数量无明显影响。田间实验表明,生防菌JA38在人参苗期的防效为80.89%,高于阳性对照组。
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