论文部分内容阅读
胃癌是我国常见的恶性肿瘤，肿瘤细胞的耐药性是导致肿瘤患者化疗失败的一个主要原因。多药耐药性(Multidrug resistance，MDR)是指细胞对多种没有明显结构相似性且作用于不同靶分子的药物的一种耐受表型。目前已经清楚MDR是多因素造成的。除了ABCB1等药泵在耐药细胞高表达等已知的一些机制外，还有很多未知的分子参与MDR的形成。为了深入了解MDR的分子机制，我们用一种在PCR基础上建立的消减杂交技术，获得了在胃腺癌多药耐药细胞系SGC7901/VCR以及SGC7901/ADR中高表达而在药敏细胞SGC7901中低表达的基因。其主要内容及结果如下： 1．经过消减杂交和PCR，从耐药胃癌细胞中共获得200多个cDNA片段，限制性内切酶鉴定表明，有86个cDNA片段长度为0.5-2.0kbp，其中63个克隆在反向打点杂交中呈阴性信号。这63个克隆中，40个来自SGC7901/ADR细胞，23个来自SGC7901/VCR细胞。 2．对上述63个cDNA片段进行测序以及BLAST同源性分析，其中SGC7901/VCR中有9个为已知基因(39％)，8个(35％)与已知的ESTs或推测基因同源，6个(26％)为新的ESTs或推测基因；SGC7901/ADR中有18个为已知基因(44％)，11个(28％)与已知的ESTs或推测基因同源，11个(28％)为新的ESTs或推测基因。 3．在27个已知基因中，按类别可分为参与代谢的酶基因、癌或类癌基因、细胞周期基因、信号转导基因、转录相关基因以及转运相关基因。其中氧硫还 第四军医人学博十研究生学位论文原蛋白、胸芹酸合成酶以及高机动性蛋白同种型 IfY已有报道与人类肿瘤耐药相关。 4．在功能未知的基因中，我们选择了来源于SGC7叨1／AD R细胞中有完整开放读框的 PTD001 （AF07705）基因进一步研究。半定量 PCR证实其在耐药细胞SGC79U ADADR中高表达。利用自制的特异性识别该基因编码产物的兔多克隆抗体；经免疫荧光结合实验分析表明PTDOm蛋白在SGC”01／AD R细胞中的表达明显高于IC”OI细胞（93．4％VS 49．3％）。