从海南、安徽、浙江等地的土壤中共分离出650株细菌,通过抑菌圈法筛选出对黄瓜叶斑病新的病原菌菊苣假单胞[Pseudomonas cichorii(Swingle)Stapp]具有拮抗作用的细菌,其中编号为JNL的菌株拮抗效果最好。采用形态学观察、生理生化特性测定、16S rDNA同源性序列分析以及gyrA基因序列分析的方法对分离的拮抗细菌进行鉴定。菌株JNL革兰氏染色反应阳性,能水解淀粉、液化明胶,甲基红试验阴性,乙酰甲基甲醇试验阴性,不能利用丙二酸盐,能利用果糖、棉子糖、半乳糖、甘露醇发酵产酸;能利用葡萄糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、棉子糖、果糖作为碳源;不能利用山梨糖、山梨醇、鼠李糖、甜醇作为碳源。结合16S rDNA同源性序列分析以及gyrA基因序列分析,菌株JNL鉴定为解淀粉芽孢杆菌[Bacillusamyloliquefaciens(Wang et al.2008)]。用利福平标记拮抗菌,探究拮抗细菌在黄瓜叶片上的定殖规律。试验结果表明:拮抗细菌能够在黄瓜叶片上定殖,诱导菌株JNL11在黄瓜叶片上呈现先增加后减少的定殖规律。在刚开始接种时,菌量最大,随着时间的推移菌量开始逐渐减少。在不同光处理条件下,诱导菌株在12 h光照12 h黑暗条件下与24 h光照处理条件下标记菌株的定殖数量没有明显的区别,但是24 h黑暗处理时,标记菌株的定殖数量明显减少。采用三种方法研究菌株JNL在黄瓜叶片上的防效,即先接种拮抗菌株菌悬液24 h后接种病原菌菌悬液;同时接种拮抗菌株菌悬液与病原菌菌悬液;接种病原菌菌悬液24 h后接种拮抗菌株菌悬液;以只喷病原菌菌悬液的黄瓜叶片作为对照。结果表明:三种处理方法黄瓜的防效分别为68.2%、65.07%、47.6%。说明接种病原菌24 h之前接种拮抗菌菌悬液能更有效防治病害。拮抗菌株JNL处理黄瓜叶片后,使黄瓜体内五种防御酶活性均比之前有所提高,其中POD活性是对照组酶活性的1.64倍,PPO、SOD以及CAT活性是对照组酶活性的2倍,PAL活性是对照的2.13倍。因此可以推断拮抗细菌JNL处理黄瓜叶片后能够诱导黄瓜产生抗病性,从而能够抵御病原菌的侵染。通过单因子变量法测定拮抗细菌最适培养条件。试验结果表明:菌株JNL最适pH为7,最适培养温度为30℃,最适碳源为半乳糖,最适氮源为硝酸钾,最适摇床转速为150 r/min,最适培养时间是24-36 h。