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环形泰勒虫病使世界250,000,000头牛受到威胁,造成重大经济损失,分布于北非、南欧、印度次大陆、中东和中亚等地。牛环形泰勒虫病是由泰勒科泰勒属的环形泰勒虫寄生于牛体内引起的以高热、贫血、出血和体表淋巴结肿大为主要临床症状的一种血液性原虫病。本病在新疆广为流行,严重危害着养牛业的健康发展。本研究工作主要包括以下三部分:1.新疆牛环形泰勒虫Tams1基因原核表达条件的优化为了提高新疆牛环形泰勒虫Tams1基因在大肠杆菌中的表达量,研究了诱导温度、诱导时间以及诱导剂(IPTG)浓度等不同条件对Tams1融合蛋白表达量的影响。试验结果表明,大肠杆菌菌株BL21(DE3)在37℃培养2.5h后,使用终浓度为2mmol/L的IPTG在25℃振荡诱导培养8h时,GST-Tams1融合蛋白表达量最高,达到2.5mg/mL。用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-Tams1融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE检测表明GST-Tams1融合蛋白大小约为56KDa,与预计的分子量大小一致。2.新疆牛环形泰勒虫Tams1基因真核表达载体的构建及免疫反应性研究采用PCR方法从梨形虫病患牛的全血基因组中扩增得到846bp的Tams1基因片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),构建Tams1基因的真核表达质粒。经测序验证后,将Tams1基因的真核表达质粒尾静脉注射小鼠进行Tams1基因的瞬时表达。取接种小鼠的肝脏提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增目的条带;用重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1皮下注射免疫小鼠4次后,进行免疫抗体检测。试验结果表明重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1含有完整的Tmas1基因片段。经Western-blot检验可得到抗原-抗体复合物产生的特异性条带,说明该重组质粒pcDNA3.1(+)-Tams1具有免疫原性。3.新疆牛环形泰勒虫GST-Tams1融合蛋白免疫反应性研究采用ELISA方法,结果显示最佳的抗原包被浓度为2.5μg/ml,血清稀释度为1:20。GST-Tams1融合蛋白抗血清效价评估结果显示随着免疫次数的增加,四次蛋白免疫的血清效价逐步升高,其中以人参皂苷为佐剂的免疫组的血清效价最高;其次是以弗氏佐剂为佐剂的免疫组;注射重组真核质粒pcDNA3.1(+)-Tams1的免疫组和注射GST-Tams1融合蛋白的免疫组的血清效价相差不多,而注射生理盐水和空载质粒pcDNA3.1(+)的对照组则很低几乎无抗体产生。