p53是迄今为止研究最多的一个抑癌基因。人类对p53的认识也经历了一个曲折的从原癌基因到抑癌基因的过程。在人类各类型肿瘤中p53表现出了很高的突变率。某些突变形式的p53不仅负显性抑制了野生型p53调控细胞周期抑制、DNA损伤修复、细胞凋亡和细胞衰老等过程的功能,而且还获得了类似癌基因促进肿瘤的发生、发展的特性。根据统计观察到TP53的一些点突变与某些肿瘤类型有高度相关性,不同突变p53蛋白的个性化治疗将是未来肿瘤治疗的热点,而针对个性化突变p53的药物的开发具有重要意义。我们应用本实验室构建的携带了p53N236S和／或H-RasG12V的p53-/-小鼠胚胎成纤维细胞,即p53-/-+S+Ras细胞和p53-/-+vector+Ras细胞,对高山黄杨和小叶黄杨的12种提取物进行抗肿瘤活性筛选,并用小鼠野生型细胞作为对照,排除具有强细胞毒性的化合物,最终获得了编号为KBA01、KBA02、KBR04以及KBR18这四种在一定浓度范围内具有选择性杀伤肿瘤细胞而不影响正常的细胞的活性化合物。我们又用几种带有p53热点突变的人类肿瘤细胞HT-29、SW480、 SK-BR-3对筛选得到的四种活性物质进一步研究探讨,以p53基因缺失的SK-OV-3细胞以及具有野生型p53功能的HCT116细胞作为参照,结果显示p53R273H点突变的HT-29细胞对KBA01、KBA02、KBR04以及KBR18四种化合物具有异于其他几种细胞的敏感性。选择其中一种化合物KBA01,以HT-29作为靶细胞,证实了KBA01能够促进HT-29细胞走向细胞凋亡。并且,KBA01还能下调HT-29细胞中突变p53的蛋白表达水平以及转录水平,另外,还伴随有Hsp90蛋白水平和转录水平的下调。突变p53蛋白以及Hsp90蛋白表达量的下降有利于肿瘤细胞生长抑制以及细胞凋亡的过程。接下来,在此基础上,我们还将对KBA01作用于HT-29细胞的分子机制进行深入研究,以期获得靶向p53R273H这一高突变率类型的疗效显著而毒副作用小的抗肿瘤药物。此外,我们还用p53-/-+S+Ras细胞和p53-/-+vector+Ras细胞采用不同的注射方式接种到具有正常免疫功能的C57/BL6小鼠体内,成功建立了具有正常免疫功能的同种小鼠移植肿瘤模型。由于采用了近源的、分子遗传背景清楚的小鼠肿瘤细胞,有效地解决了异源免疫排斥问题,而选择野生型小鼠作为接种对象,能够忠实地模拟人类肿瘤疾病的情况,该模型可以用于评价药物的抗肿瘤功效,评价通过提升机体免疫功能药物的抗肿瘤功效以及研究药物抗肿瘤作用分子机理。