在我国种植苜蓿的地区因非生物胁迫造成的牧草减产,家畜饲料供应紧张而每年造成不小的经济影响。本研究以野生黄花苜蓿(Medicago falcata)为实验材料,在课题组前期黄花苜蓿转录组测序结果的基础上分析并克隆了2条ERF基因家族成员cDNA,分别命名为MfERF026和MfERF086。运用Q-PCR技术分析研究了黄花苜蓿MfERF026和MfERF086基因在低温、高盐、干旱等非生物胁迫下根、茎和叶中的表达模式。以植物双元表达载体pKGWRR为基本骨架分别构建基因的超表达、对照和tasiRNA干扰3种表达载体。将上述3种重组质粒转入到发根农杆菌Arqua1中,通过发根农杆菌介导的毛根转化法将外源基因转入到截形苜蓿A17根组织中培养2周后分别进行胁迫应答实验。以胁迫处理后根组织cDNA为模板,分别检测在干旱信号通路中起关键作用的MtRD2基因和在冷信号通路中起关键作用的CAS15A基因的相对表达量。同时通过结瘤实验分析研究MfERF026和MfERF086基因是否参与根瘤菌的结瘤作用。结果表明,黄花苜蓿MfERF026基因和MfERF086基因对根瘤菌无明显应答,但是2条基因都响应低温、高盐、干旱等多种非生物胁迫。在上述非生物胁迫下,MfERF026基因在根、茎、叶中的表达量随着时间均有升高或降低的明显变化,说明MfERF026基因在参与植物对非生物胁迫的调节;MfERF086基因在根、茎、叶中的表达被抑制,在-8℃冷冻胁迫和ABA胁迫下其在茎组织中几乎不表达,而在根组织中其表达量有缓慢的回升趋势。在上述非生物胁迫下过表达或者干扰MfERF026基因后,MtRD2基因的表达量都有明显的变化,推测MtRD2基因很可能为MfERF026基因的下游基因,且被MfERF026负调控;MfERF086基因表达被干扰后,MfCAS15A基因的表达量得到了极显著提高,说明MfERF086基因可能参与调控了MfCAS15A基因的表达。本研究将为牧草育种提供候选基因。