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目的观察高糖刺激下肾小管上皮细胞Rap1b表达变化,初步探讨Rap1b蛋白对高糖诱导的人近端肾小管细胞凋亡保护机制。方法常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),以不同浓度葡萄糖(5mM、10mM、20mM、30mM)和高浓度葡萄糖(30mM)在不同时点刺激HK-2细胞,Western Blot检测Rap1b-GTP表达变化。转染pcDNA3.1/Raplb或empty pcDNA3.1vector质粒,以Westem blot检测低糖及高糖环境下HK-2细胞GSK-3β磷酸化水平、核β-catenin蛋白及凋亡蛋白caspase-3表达变化,应用RT-PCR检测抗凋基因survivin、bcl-2表达变化。进一步加入Licl或wortmannin抑制或激活GSK-3β,以Westem blot检测高糖环境下HK-2细胞β-catenin蛋白及凋亡蛋白caspase-3表达变化,RT-PCR检测抗凋亡基因survivin、bcl-2表达变化。结果(1)HK-2细胞Rap1b-GTP的表达在30mM D-葡萄糖处理2h时表达最弱。(2)过表达的Rap1b可以上调GSK-3的磷酸化水平及促进β-catenin核转录,上调抗凋亡基因survivin及Bcl-2表达,抑制凋亡蛋白激活。(3)GSK-β抑制剂LiCl促进β-catenin核转录,上调抗凋亡基因survivin及Bcl-2表达,抑制凋亡蛋白激活。而GSK-3β间接抑制剂wortmannin抑制β-catenin核转录,降低抗凋亡基因survivin及Bcl-2表达,促进凋亡蛋白的激活。结论(1)高葡萄糖抑制HK-2细胞Rap1b-GTP活性表达,且与凋亡发生相关。(2)过表达的Raplb逆转高糖刺激下HK-2细胞凋亡蛋白的激活。(3)Raplb通过促进GSK-3p磷酸化及(3-catenin细胞转录,调节下游抗凋亡基因的表达。