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目的:
从CNE-2Z细胞系中建立LMP-1稳定的高及低表达的鼻咽癌单克隆细胞株并研究其生物学特性,为后续采用RNAi方法阻断LMP-1表达来治疗鼻咽癌的研究提供更为合适的细胞模型。
方法:
采用有限稀释法,从人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2Z中分离出若干个单克隆细胞株,通过免疫细胞化学方法检测各单克隆细胞株LMP-1的表达情况,从中筛选出LMP-1高表达及低表达的单克隆细胞株,连续传代至30代。用光学显微镜观察两细胞株的形态学特征,结晶紫染色法和细胞有丝分裂指数法检测两者的增殖情况,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期、增殖指数(PI)和凋亡率,平板克隆形成实验检测克隆形成率,染色体分析法细胞株的核型特点。
结论:
(1)从CNE-2Z细胞系中成功分离得到12株单克隆细胞株。
(2)通过筛选和传代30代,成功建立稳定的LMP-1高表达及低表达的两个单克隆细胞株L12(高表达)和L9(低表达)。
(3)LMP-1高及低表达细胞株的生物学特性不同,主要表现为L12细胞较L9细胞分裂增殖较快,凋亡发生率较低,在平板上形成克隆能力较强及染色体数量较多(L12属于超三倍体,而L9属于亚三倍体),出现较多的染色双微体。
(4)结果清楚地提示LMP-1可影响鼻咽癌细胞的形态、生长和凋亡,所建立的L12和L9单克隆细胞株可能为鼻咽癌的研究提供有用的细胞模型。