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背景宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一,感染高危型人乳头瘤病毒(high risk-human papillomaviruses,HR-HPVs)是其发生与演进的重要基础,E7的持续表达是HR-HPVs致癌的关键,其可通过结合并降解pRb蛋白等,导致细胞异常增殖。本课题组经Agilent人基因表达谱芯片分析,发现沉默E7表达后,肾细胞癌下调基因1(down-regulated in renal cell carcinoma1, DRR1)表达上调3-11倍。DRR1广泛表达于正常组织,但在许多癌细胞系和原发性肿瘤中表达明显降低,DRR1作为肿瘤抑制基因可能在癌变过程中发挥重要作用。目的以HPV16E7(?)日性和阴性的宫颈癌细胞系、正常宫颈鳞状上皮、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)和宫颈鳞癌组织为研究对象,探讨DRR1在HPV16相关宫颈癌发生与演进中的作用,以期丰富HPV16的致癌机制,为探讨HPV16相关肿瘤新的治疗措施提供实验和理论依据。方法1.以HPV16E7日性宫颈癌CaSki和SiHa细胞及HPV16E7阴性宫颈癌C33-A细胞为研究对象,采用Western blotting方法检测E7和DRRl的表达,分析HPV16E7表达与DRR1表达的关系。2.以HPV16E7阳性和阴性的正常宫颈鳞状上皮、CIN和宫颈鳞癌组织为研究对象,通过免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)方法检测E7和DRR1的表达,分析HPV16E7与DRR1表达的关系。3.常规培养HPV16E7阴性的宫颈癌C33-A细胞至对数生长期,提取总RNA,体外逆转录合成cDNA第一条链,PCR扩增DRR1基因编码序列,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-DRR1并鉴定,经脂质体介导将pcDNA3.1-DRR1重组质粒转染对数生长期的宫颈癌CaSki细胞,通过MTT绘制细胞生长曲线、平板克隆形成实验、细胞周期分布,Annexin V-FITC/PI结合流式细胞术等方法观察稳定表达DRR1对HPV16E7阳性宫颈癌CaSki细胞增殖和凋亡能力的影响。结果1. Western blotting结果显示：①C33-A细胞中HPV16E7无表达,CaSki细胞和SiHa细胞中可见HPV16E7表达。②C33-A细胞中DRR1的表达显著高于CaSki细胞和SiHa细胞(P<0.01),CaSki细胞和SiHa细胞中DRRl的表达无显著差异(P>0.05)。2.IHC结果显示：HPV16E7阳性正常宫颈鳞状上皮、CIN和宫颈鳞癌组织中DRR1的表达均分别显著低于HPV16E7阴性的正常宫颈鳞状上皮组织、CIN和宫颈鳞癌组织,相关系数分别为-0.452,-0.485及-0.444(P<0.01)。3.①MTT比色法绘制细胞生长曲线的结果显示：与CaSki-vect细胞相比,CaSki-DRR1细胞生长速度明显减慢(P<0.01),倍增时间显著延长(P<0.01)。②平板克隆形成实验结果显示：CaSki-DRR1细胞克隆形成均数明显低于CaSki-vect细胞(P<0.01),且克隆体积明显较小。③流式细胞术检测细胞周期分布的结果显示：与CaSki-vect细胞相比,CaSki-DRR1细胞G1期阻滞(P<0.01),但S期和G2/M期细胞百分比均数均明显减少(P<0.01)。④Annexin V-FITC/PI结合流式细胞术检测细胞凋亡结果显示：CaSki-DRR1细胞凋亡均数明显高于CaSki-vect细胞(P<0.01),凋亡细胞百分比分别为：12.116%和0.016%。结论1. HPV16E7阳性和阴性宫颈癌细胞系和宫颈组织中,E7表达与DRRl表达负相关。2.稳定表达DRR1可显著抑制HPV16E7P日性宫颈癌CaSki细胞的增殖能力,促进其凋亡。