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本文通过瘤胃体外发酵实验,旨在研究干燥和贮存对瘤胃固氮菌和纤维素分解菌活性的影响。以瘤胃中分离的自生固氮菌和纤维素分解菌作为实验菌株,经过冷冻干燥和室温干燥处理,室温贮存30天和90天。平板计数法测定干燥后菌株存活率,以活菌总数4.0×109CFU·L-(纤维素分解菌和固氮菌的活菌数比为4：1)添加于体外瘤胃发酵体系中,培养24小时,测定发酵参数、产气量、DM(干物质降解率)和NDF(中性洗涤纤维)、ADF(酸性洗涤纤维)降解率,依此评定干燥和贮存后存活菌株的活性。瘤胃液中纤维素分解菌和固氮菌的分离、纯化和筛选。选用3头安装永久性瘤胃瘘管、体况良好的三岁半干奶期荷斯坦奶牛作为瘤胃液供体。通过特异性选择培养基从瘤胃液中分离得到固氮菌和纤维素分解菌。通过生理生化实验,筛选出两株纤维素分解菌(C1和C2)和两株固氮菌(N1和N2)。将分离的固氮菌和纤维素分解菌组合,形成ClN1(I),ClN2(Ⅱ)、 C2N1(Ⅲ)和C2N2(Ⅳ)四个组合菌。分离得到的固氮菌和纤维素分解菌联合应用效果。向瘤胃发酵液中加入固氮菌和纤维素分解菌,未添加菌为对照组,每组3次重复；将纤维分解菌与固氮菌(混合比例为4：1)添加于体外瘤胃发酵瓶中,每个发酵瓶含有1.0g玉米秸秆和80mL混合培养液,活菌总数为4.0×109CFU·L-1,发酵24h。测定pH,NH3-N,产气量,菌体蛋白含量,VFA,以及NDF、ADF和DM降解率等指标。结果表明：添加纤维素分解菌和固氮菌可以明显提高玉米秸秆NDF、ADF和DM降解率及产气量(P<0.05),并且提高了菌体蛋白含量及TVFA和乙酸含量,降低了NH3-N浓度。干燥和贮存对固氮菌和纤维素分解菌活菌数的影响。将固氮菌和纤维素分解菌分为两部分,一部分进行冷冻干燥,另一部分室温干燥,制成固态菌剂。固态菌经室温(5-25℃,3-5月)贮存30天和贮存90天。然后复活经过干燥和贮存后存活的菌株,测定菌株的存活率。结果表明：冷冻干燥菌株平均存活率高于室温干燥,后者是前者的53～77%,冷冻干燥方法更有益菌株的存活。贮存90天时,室温干燥存活率仅为9%左右,但其菌株活菌数仍保持在109个/mL。干燥和贮存对固氮菌和纤维素分解菌活性的影响。将干燥和贮存后的菌株复活,按复活后存活的纤维素分解菌与固氮菌4：1比例制成混合菌液,添加于瘤胃体外发酵体系中(发酵液体积为80m1,混合活菌总数为4.0×109CFU·L-1),添加未经干燥的菌株(4℃液体保存)为对照,体外发酵24h。测定pH, NH3-N,产气量,菌体蛋白含量,VFA,以及NDF、ADF和DM降解率等指标。结果表明：冷冻干燥和室温干燥处理菌株对发酵液pH值,氨氮(NH3-N)浓度,菌体蛋白,VFA,以及NDF、ADF和DM降解率无显著影响(P>0.05)；室温干燥降低了IV组的产气量(P<0.05),但两种干燥方法对其产气量影响无显著差异(P>0.05)。本研究表明,所选菌株对两种干燥方法的耐受度相近,贮存30和90天时,常温干燥菌存活率约为冷冻干燥菌的60%和53%,但存活菌株的活性相近。综上所述,实验筛选的纤维素分解菌和固氮菌混合添加促进了瘤胃的发酵,使瘤胃更好地利用秸秆纤维素；所选固氮菌和纤维素分解菌对冷冻干燥和室温干燥的耐受度相近,经干燥和贮存的存活菌株的活性相近。本实验结果为纤维素分解菌和固氮菌的固态制剂研发奠定了基础。