论文部分内容阅读
目的研究内毒素诱导急性肺损伤(Acute lung injury ,ALI)大鼠动脉血氧分压(Partial pressure O2, PaO2)、肺组织湿/干重(W/D)比值、肺组织病理形态学、肺组织基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的变化及其盐酸多西环素(Doxycycline,DOX)对ALI的保护作用,为临床防治ALI提供实验依据。方法本研究应用气管内滴注脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的方法复制大鼠ALI模型。雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠72只,无特定病原体(Specefic pathogen free,SPF)级,体重在220～250g之间,随机分为3组:对照组(n=24)、ALI组(n=24)﹑治疗组(n=24)。每组动物按时间点分为4个亚组(n=6),分别在气管内滴注LPS后1h、2h、4h和8h进行观察。对照组:0h气管内滴注生理盐水(NS)0.3ml,10min后股静脉注射NS 1ml。ALI组:0h气管内滴注LPS 0.2mg/kg(溶于0.3ml NS),10min后股静脉注射NS 1ml。治疗组:0h气管内滴注LPS 0.2mg/kg(溶于0.3ml NS),10min后股静脉注射DOX20mg/kg(溶于1ml NS)。在设定时间点,即实验的1h、2h、4h和8h经左心室穿刺取血2ml行血气分析;随后处死动物,观察肺组织湿/干重(W/D)比值、病理形态学的变化,同时免疫组织化学和免疫印迹(Western Blot)法检测MMP-2和MMP-9在肺组织中的表达。结果1.血气分析:与对照组比较,ALI组和治疗组在LPS致伤后1h至8h动脉血PaO2均显著降低(P<0.01),但治疗组各时间点的动脉血PaO2均显著高于ALI组(P<0.05～0.01)。2.W/D比值:与对照组比较,ALI组和治疗组1h至8h W/D比值显著增加(P<0.01),但治疗组各时间点的W/D比值较ALI组显著降低(P<0.05～0.01)。3.病理形态学观察见对照组肺组织结构基本正常,肺泡结构清晰; ALI组肺弥漫性充血水肿,血管周围及肺泡腔内有大量渗出液,肺泡间隔增宽,肺间质有大量多形核白细胞浸润且可见肺透明膜形成;治疗组肺泡结构尚可,肺间质及肺泡内水肿液渗出、中性粒细胞浸润程度较ALI组明显减轻。4.免疫组织化学检查见MMP-2主要定位于肺泡和支气管黏膜上皮细胞,支气管壁平滑肌细胞、腺体,肺间质血管内皮细胞、中性粒细胞; MMP-9定位基本同MMP-2。正常肺组织中, MMP-2和MMP-9均呈弱阳性表达; ALI组MMP-2和MMP-9呈强阳性表达;治疗组大鼠肺组织MMP-2和MMP-9表达较ALI组明显减弱(P<0.01)。5.Western Blot检测显示对照组肺组织中MMP-2和MMP-9有少量表达,ALI组和治疗组MMP-2、MMP-9表达在各时相点均较对照组显著增高(P<0.01),但治疗组又较ALI组显著改善(P<0.05～0.01)。结论1.气管内滴入LPS能够成功复制内毒素性大鼠ALI模型。2. MMP-2和MMP-9在内毒素诱导的大鼠ALI时有高表达,提示其在ALI的发展过程中有重要作用。3.DOX能够抑制大鼠肺组织MMP-2, MMP-9的表达,减轻肺组织的损伤程度。