子宫内膜异位症miRNA表达谱的变化及相关机制研究

来源 :中南大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:liongliong566
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目的:研究Dicer和Drosha在子宫内膜异位症在位及异位组织中的表达及其临床意义。方法:利用荧光定量PCR和western blot检测在位和异位子宫内膜组织中Dicer和Drosha的表达差异;体外培养在位子宫内膜组织,采用siRNA干扰Dicer和Drosha,比较未干扰组与干扰对照组之间子宫内膜细胞的增殖差异,并用流式检测细胞凋亡情况;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况;western blot检测凋亡抑制蛋白bcl-2和促凋亡蛋白bax的表达变化。结果:1.异位子宫内膜组织中的Dicer和Drosha的表达低于在位子宫内膜组织。2.干扰Dicer和Drosha后能够促进在位内膜细胞的增殖,抑制细胞凋亡。3.干扰Dicer和Drosha后能够上调在位子宫内膜细胞中TGF-β1的表达;增加凋亡抑制蛋白bcl-2的表达,减少促凋亡蛋白Bax的表达。结论:miRNA的重要调节者Dicer和Drosha可以影响TGF-β1及bcl2/bax的表达进而影响细胞的增殖和凋亡,从而参与了子宫内膜异位症的形成.目的:研究子宫内膜异位症患者在位内膜及异位内膜组织中miRNA基因表达的差异,从分子水平探讨子宫内膜异位症的发病机制。方法:采用基因芯片技术分析子宫内膜异位症患者的在位内膜组织及异位内膜组织标本,筛选出两者之间的差异miRNA,对差异的miRNA进行靶基因预测以及对调节靶基因的miRNA频数做相关统计,然后将差异miRNA所对应的靶基因进行功能分类,使用数据库分析这些靶基因可能参与的信号通路,构建出MicroRNA-Gene的调控网络,利用网络生物学和图论的方法对网络进行分析,筛选出网络中关键的miRNA和被调控的靶基因。结果:1.通过miRNA芯片分析,以Pval<0.05为有效基因,ratio>2为上调标准,ratio<0.5为下调标准,筛选出以hsa-miR-202为代表的12个表达上调的miRNA,以hsa-miR-33b为代表的39个表达下调miRNA。2.通过在线软件分别预测其上调和下调差异的miRNA的靶基因再通过差异靶基因的GO功能分析,发现下调差异的miRNA的靶基因中以SMC1A等为代表,其在细胞进程、生物过程和生物调节等生物学功能上富集;上调差异的靶基因中以CACNA2D3为代表,其在细胞进程、生物过程和代谢过程等生物学功能上富集。3.通过分析差异miRNA的靶基因可能影响的pathway,发现下调差异的miRNA的靶基因主要集中在卵母细胞减速分裂(Oocyte Meiosis)和肿瘤发生等信号通路上;发现上调差异的miRNA的靶基因主要集中在MAPK和肿瘤发生等信号通路上。4.构建了miRNA与靶基因的调控网路图,为进一步研究其差异miRNA的功能奠定了基础。结论:hsa-miR-202、hsa-miR-508-3p等12个miRNA在异位内膜中表达上调,hsa-miR-33b、hsa-miR-34b等39个miRNA表达下调,这些差异的miRNA调控的靶基因主要参与调节代谢以及基因转录等过程,进而主要影响MAPK、Oocyte Meiosis以及肿瘤发生等信号通路,参与子宫内膜异位症的发生发展。
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