论文部分内容阅读
第一部分藿香正气口服液对肠道菌群稳态的调节作用目的:通过比较健康成人服用藿香正气口服液前后肠道菌群组成结构的变化,探究藿香正气口服液对健康成人的肠道菌群稳态的调节作用,并利用抗生素干预建立小鼠肠道菌群失调的模型,验证藿香正气口服液对肠道菌群的调节作用及肠道组织结构的保护作用,为藿香正气口服液日常使用的安全性提供新的实验依据。方法:(1)人群试验:按照纳入排除标准招募40名健康成人志愿者(男21名,女19名),连续服用藿香正气口服液(10 m L/天)7天,并于服用前24小时(第0天)、连续服用7天后24小时(第8天)和停药后7天(第15天)分别收集粪便样本进行16S r RNA测序;(2)动物实验:64只7周龄雌雄各半的C57BL/6J的健康小鼠在标准环境中适应性喂养一周后,分成1)溶剂对照组(自由摄入饮用水);2)抗生素(ABX)组在第一周灌胃抗生素母液10 m L/kg(氨苄西林1 g/L、万古霉素5 g/L、硫酸新霉素1 g/L、甲硝唑1 g/L配制),连续七天;3)藿香正气口服液(HXZQ)组在第二周灌胃藿香正气口服液1.3 m L/kg,连续7天;4)抗生素+藿香正气口服液(ABX+HXZQ)组,第一周灌胃抗生素母液,第二周灌胃藿香正气口服液,计量同上;每组16只小鼠,雌雄各半。灌胃结束后收集小鼠粪便进行16S r RNA测序观察肠道菌群的多样性及组成结构的变化,苏木精-伊红染色(H&E)观察小鼠肠道组织病理学改变;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中炎症因子的含量。结果:(1)人群试验:藿香正气口服液对健康状态下的肠道微生物的组成和多样性仅有轻微的积极影响,但个别肠道微生物初始多样性较低的个体服用藿香正气口服液后在门水平观察到的Shannon指数显著高于服药前,显著提高了β多样性;服用藿香正气口服液后类杆菌、双歧杆菌和变形杆菌的丰度显著升高,但在属水平上观察到Blautia的丰度逐渐降低;但服用前后肠道菌群的组成结构及生物学上的统一性均无显著差异。(2)动物实验:与ABX组相比,藿香正气口服液可能通过调节血浆中IL-6的水平发挥抗炎效果,但不会对小鼠的结肠组织结构产生显著的影响;藿香正气口服液的干预改善了抗生素诱导的肠道微生物的紊乱,并增加了鼠杆菌科、乳酸杆菌和阿克曼菌的丰度,降低了肠球菌和克雷伯菌的丰度。结论:藿香正气口服液对健康成人的肠道菌群及抗生素诱导的小鼠肠道菌群失调均具有一定调节作用,并可以通过调节血浆中炎症因子的水平发挥抗炎效果,阐明了藿香正气口服液在日常使用中的安全性,并为藿香正气口服液与肠道菌群稳态的相互作用提供了新的见解。第二部分藿香正气口服液对脂多糖诱导的小鼠炎症反应的预防作用目的:藿香正气口服液是一种主要用于胃肠道疾病的家庭用药,本研究旨在研究藿香正气口服液的预处理是否能预防脂多糖(LPS)诱发的不良炎症反应及其作用的潜在机制。方法:7周龄的雄性C57BL/6 J小鼠分别灌胃低剂量(1.3 m L/kg)和高剂量(2.6 m L/kg)的藿香正气口服液,持续7天,最后一天腹腔单次注射6 mg/kg的LPS。地塞米松(DEX)治疗作为阳性对照。收集小鼠粪便进行16S r RNA基因测序,并检测皮层组织及肠组织中的炎症反应。结果:实验结果表明,低剂量或高剂量的藿香正气口服液均能显著降低LPS诱导的小鼠血浆中IL-6、小肠组织和皮质组织中IL-1β、IL-6和Tnf炎症因子水平。LPS显著地降低了小鼠肠道菌群的Simpson指数,Shannon指数,Ace指数和Chao指数,并破坏了肠道微生物群落的组成,显著降低了肠道菌群的α多样性和β多样性,但藿香正气口服液并没有成功地预防由LPS诱导的肠道菌群的失调。此外藿香正气口服液对部分脑肠肽如生长抑素(Sst)、生长抑素受体1(Sstr2)、速激肽前体1(Tac1)和生长激素促泌素受体(Ghsr)的改变具有较好的预防作用。藿香正气口服液预处理可以显著减缓了由LPS诱导的肠道组织中NF-κB信号通路相关的蛋白phospho-p38、p38、phospho-p44/42、p44/42、p50和p65相对表达水平升高。结论:藿香正气口服液对LPS的预防效应可能是通过抑制炎症的发生及改善部分脑肠肽来实现的。这些发现为藿香正气口服液对胃肠道炎症相关的疾病的治疗提供了新的线索。