RNAi技术抑制人脐带间充质干细胞B7-H1基因表达的研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gang098
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:   建立有效的脂质体瞬时转染法,转染小分子干扰RNA(small interferingRNA,siRNA)沉默人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stemcells,hUC-MSCs)内B7-H1(PD-L1)的表达。   方法:   设计、化学合成针对B7-H1基因的4组siRNA分子序列,采用阳离子脂质体法瞬时转染hUC-MSCs,运用实时荧光定量PCR、Western-blot方法从mRNA、蛋白水平检测hUC-MSCs内B7-H1的表达。   结果:   4组特异性B7H1-siRNA序列(B7H1-homo-256组、 B7H1-homo-325组、B7H1-homo-689组、B7H1-homo-799组)与NC对照组在转染6h后可在荧光显微镜下观察到绿色荧光,转染效率分别为75%、80%、82%、84%、78%。在转染后24h、48h均有效地抑制了B7H1基因在mRNA和蛋白水平的表达。48h时,Real-time PCR检测mRNA,B7H1-homo-689组抑制效率最高,达(81.33-6)%。48h时,Western-blot检测hUC-MSCs内B7H1蛋白表达中空白对照和阴性对照组的表达不受影响。B7H1-homo-689组与转染试剂对照组相比,蛋白表达抑制最显著,抑制率达58%。   结论:   靶向B7H1的siRNA分子片段可以有效地抑制hUC-MSCs内B7H1的表达,为后续相关研究提供实验方法。
其他文献
多元的网络舆论渠道,极速的话题交互与传播,直接冲击并影响青少年这一庞大受众群体,造就了喧嚣的网络话语氛围。如何通过服务牵动、价值传播和文化感染,进而达成润物细无声的牵引,引导青少年听党话跟党走,这给我们提出了新的挑战和机遇。温岭共青团以打造社会化的运作模式、项目化的管理形式、品牌化的创建方式来探索青少年网络文明提升工作的长效机制,构建了以融媒体平台为主脉络,以青年之声、新青年、项目对接等互动平台为
目的:  Gankyrin是一个新的癌基因,最早在肝癌组织发现。Gankyrin编码的蛋白含有226个氨基酸,由7个锚蛋白(ankyrin)重复序列组成,在结构上高度保守,分子量约为25kDa。研究表明,
目的:分析剖宫产术后子宫切口瘢痕妊娠(Cesarean Scar Pregnancy,CSP)早期的声像图特征,探讨经阴道彩色多普勒(Transvaginal Color Doppler Sonography,TVCDS)超声对剖宫产术后
目的:随着影像学的发展,脑白质损害的检出率越来越高。目前,脑白损害对认知功能的影响已经成为研究热点。本文重点对缺血性脑白质损害患者的注意功能进行研究,探求反映缺血性脑白