黄瓜西瓜花叶病毒(WMV)抗性的遗传研究和基因定位

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西瓜花叶病毒是侵染葫芦科的重要病毒之一,其在黄瓜上的流行受到人们的关注。传统的病毒检测方法受毒源、接种环境等限制,缺乏快速检测方法。近几年来,分子标记技术被应用于多方面。分子标记辅助育种技术,相对于传统育种,可以缩短育种周期,并且可从分子水平上找到抗病基因或与抗病相关的QTL位点。   本试验利用高代自交系“65G”(感病)和“228”(抗病)构建的六世代群体,对WMV进行了遗传规律的分析,并利用黄瓜基因组SSR引物对WMV的抗病基因wmv进行了定位。结果如下:   1.通过对以高代自交系“65G”和“228”构建的六世代群体进行WMV苗期鉴定,发现FI全感病,以65G回交的群体全感病,以228回交的群体一半感病、一半抗病,F2感病与抗病比为3∶1。试验表明,该遗传群体对WMV的抗性是由隐性单基因控制的。   2.根据前人研究结果和黄瓜基因组序列综合分析,挑选黄瓜6号染色体上的243对SSR引物,再结合BSA法进行分析,获得具有多态性的引物111对,引物多态性为45.7%。BSA建池筛选后,初步获得20对标记可能与wmv连锁,通过Joinmap4.0做连锁图,最终将wmv定位在黄瓜6号染色体上,wmv位于标记SSR17604和SSR17591之间,遗传距离分别为5.6cM和25.8cM。根据前人研究和本课题现有的标记在wmv初定位区间寻找并增加6个新标记后,wmv被进一步定位到SSR10449和SSR16005之间,遗传距离分别是2.9cM和0.3cM。   3.对SSR16005和SSR10449之间的序列进行分析,发现wmv定位区域的物理距离约为416.5Kb,定位区间有88个候选基因,其中5个与抗病基因相关。   4.利用获得的与wmv紧密连锁的3个侧翼标记SSR16005、SSR10449和UW016108对28个不同遗传背景的黄瓜材料进行验证,结果SSR16005的准确率为78.5%,SSR10449和UW016108的准确率均为89.3%。使用三个标记相互印证进行验证的准确率可达96.4%。
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