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炎症性肠病(IBDs)是免疫介导的慢性、间歇性复发肠道炎症，主要包括克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)。内脏超敏反应(VH)，作为IBDs的一个重要的病理生理机制，近几年受到越来越多的关注。在70％IBDs病例的急性期和恢复期，持续释放的炎性介质导致肠壁神经末梢敏感化，并引起腹痛。2/3CD病例表现为回肠末端穿透肠壁性炎症。患回肠炎的CD患者是否遭受内脏敏感困扰似乎存在争议，并且证据缺乏。妥善解决对VH的争议需要选择CD模型进行验证，以增加对该领域的了解。对CD回肠炎的内在超敏机制的理解，可以使用特定的动物回肠CD模型来解决。尽管几种因素，如炎症、心理和肠道异常感觉和运动功能，有助于外周和中枢敏感化，但VH确切机制不完全清楚。细胞膜蛋白激活受体-2（PAR-2）与降钙素基因相关肽（CGRP）共表达在VH形成中的作用，吸引研究者们去扩展该领域里知识。现没有单一的治疗方法能够缓解病人VH。VH治疗方法主要集中在抑制异常黏膜免疫反应方面。这些治疗尽管在一些患者成功，但在大多病例，特别是在炎症消退期，并无明显效果。这样就需要新的治疗方法。针灸是一种传统中医治疗方法，在中国已有几千年的实践经验。与药物疗法相比，电针(EA)安全，且无并发症。虽然电针似乎是胃肠道疾病患者和实验动物VH的一种有前途的治疗方法，但至今没有关于其缓解回肠炎性VH的报道。在EA成为一种治疗VH新方法前，需要科学证据证明它是否通过干预PAR-2和CGRP发挥作用。因此，本研究首先揭示了TNBS诱导的回肠炎中存在VH，然后探讨了在VH过程中电针刺激对脊髓PAR-2调节的CGRP和c-Fos表达干预。
1.TNBS通过诱导大鼠回肠炎引发内脏超敏
目的:为了研究2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠回肠炎中内脏超敏的存在。
方法:将雄性SD大鼠麻醉，打开腹腔，分别于回肠注射TNBS（0.6ml，80mg/kg，于30％乙醇中，n=48），等体积的30％乙醇(n=24)和生理盐水(n=24)。分别于第1、3、7、14、21和28天，内脏超敏通过评估大鼠内脏在20、40、60、80和100mmHg结直肠扩张压力(CRD)下的内脏运动反应(VMR)确定。CRD测试后，立即安乐死大鼠，采集终端回肠段样品，采用ELISA法检测MPO和细胞因子（TNF-α，IL-1β，IL-6）含量;脊髓背根神经节(T11)用于免疫组织化学法测定CGRP含量。
结果:在各组中，仅TNBS组在第3天开始表现透壁炎症，在7天达到最明显，随后逐渐减退并持续到第21天。回肠炎大鼠在第7天至第21天对CRD出现明显VMR(P＜0.05)，背根神节CGRP免疫反应阳性细胞在第7天至第21天显著增加(P＜0.05)，这与TNBS处理大鼠内脏过敏反应一致。
结论和临床关联:TNBS注入回肠诱导透壁回肠炎，包括肉芽肿和内脏过敏。该模型由于模仿了CD的临床表现，可提供探讨肠道炎症和内脏超敏发病机制的思路，并为治疗克罗恩回肠炎提供了治疗方案。
2.电针通过对脊髓PAR-2和CGRP激活的干预缓解内脏超敏
目的:本研究旨在确认EA刺激后三里(ST-36)穴位对TNBS诱导回肠炎山羊的VH治疗效果，并探讨EA对脊髓PAR-2介导CGRP和c-Fos表达的影响。
方法:山羊完全麻醉后，进行右侧剖腹手术。于VH组(n=12)、假针组(n=6)和EA组(n=6)的回肠壁注射30 mg TNBS和30％的乙醇混合物，对照组(n=12)注射等体积0.9％生理盐水。术后第7天，分别从VH组和对照组取6只山羊，行回肠末端切除术，用于病理组织检查和ELISA检测髓过氧化物酶，以评估炎症状态。
实验山羊俯卧保定。EA组山羊于第7天电针(60 Hz，3mA，ST-36)30 min，其后每3天电针1次，持续到第22天（共6次）。假针组只插针不通电，保持30 min。对照组和VH组山羊每天同一时间以相同的方式保定30 min，不插针也不通电。每次电针结束后，给予各组山羊结直肠扩张刺激，EMG定量记录其内脏运动反应。最后1次测定后，山羊安乐死，并采取脊髓(T10-L1)，分别采用免疫组化、Western blotting和qPCR检测PAR-2、CGRP和c-Fos表达水平。同时，每头山羊取距近回盲交接处15 cm的6 cm回盲肠段，用于组织病理学检测。
结果:TNBS组山羊在7天表现出黏液样便或血性稀便、行动迟缓、体重减轻、回肠组织肉眼和显微病理学积分以及MPO浓度显著增加。显微镜下观察， VH组和假针组山羊在22天可见轻微回肠炎症，而电针组山羊没有回肠炎变化。与VH组相比，EA组山羊对各种CRD刺激表现较低的VMR。电针具有累积效应，电针组山羊在第16天80(P＜0.05)和100 mmHg(P＜0.01)扩张压力下VMR减弱;于第19天和22天，40、60、80和100 mmHg扩张压力下VMR均下降(P＜0.01)。重复电针处理显著抑制脊髓PAR-2、 CGRP和c-Fos表达。
结论和临床关联:TNBS注射到回肠透壁，成功诱导了回肠炎。电针通过下调PAR-2，调节在脑-肠轴伤害性刺激的脊髓传输中的CGRP和c-Fos共表达。电针刺激治疗表现了显著的抗超敏效果。重复电针疗法可能有效地治疗IBDs，IBS等功能性肠病引发内脏过敏。
1.TNBS通过诱导大鼠回肠炎引发内脏超敏
目的:为了研究2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠回肠炎中内脏超敏的存在。
方法:将雄性SD大鼠麻醉，打开腹腔，分别于回肠注射TNBS（0.6ml，80mg/kg，于30％乙醇中，n=48），等体积的30％乙醇(n=24)和生理盐水(n=24)。分别于第1、3、7、14、21和28天，内脏超敏通过评估大鼠内脏在20、40、60、80和100mmHg结直肠扩张压力(CRD)下的内脏运动反应(VMR)确定。CRD测试后，立即安乐死大鼠，采集终端回肠段样品，采用ELISA法检测MPO和细胞因子（TNF-α，IL-1β，IL-6）含量;脊髓背根神经节(T11)用于免疫组织化学法测定CGRP含量。
结果:在各组中，仅TNBS组在第3天开始表现透壁炎症，在7天达到最明显，随后逐渐减退并持续到第21天。回肠炎大鼠在第7天至第21天对CRD出现明显VMR(P＜0.05)，背根神节CGRP免疫反应阳性细胞在第7天至第21天显著增加(P＜0.05)，这与TNBS处理大鼠内脏过敏反应一致。
结论和临床关联:TNBS注入回肠诱导透壁回肠炎，包括肉芽肿和内脏过敏。该模型由于模仿了CD的临床表现，可提供探讨肠道炎症和内脏超敏发病机制的思路，并为治疗克罗恩回肠炎提供了治疗方案。
2.电针通过对脊髓PAR-2和CGRP激活的干预缓解内脏超敏
目的:本研究旨在确认EA刺激后三里(ST-36)穴位对TNBS诱导回肠炎山羊的VH治疗效果，并探讨EA对脊髓PAR-2介导CGRP和c-Fos表达的影响。
方法:山羊完全麻醉后，进行右侧剖腹手术。于VH组(n=12)、假针组(n=6)和EA组(n=6)的回肠壁注射30 mg TNBS和30％的乙醇混合物，对照组(n=12)注射等体积0.9％生理盐水。术后第7天，分别从VH组和对照组取6只山羊，行回肠末端切除术，用于病理组织检查和ELISA检测髓过氧化物酶，以评估炎症状态。
实验山羊俯卧保定。EA组山羊于第7天电针(60 Hz，3mA，ST-36)30 min，其后每3天电针1次，持续到第22天（共6次）。假针组只插针不通电，保持30 min。对照组和VH组山羊每天同一时间以相同的方式保定30 min，不插针也不通电。每次电针结束后，给予各组山羊结直肠扩张刺激，EMG定量记录其内脏运动反应。最后1次测定后，山羊安乐死，并采取脊髓(T10-L1)，分别采用免疫组化、Western blotting和qPCR检测PAR-2、CGRP和c-Fos表达水平。同时，每头山羊取距近回盲交接处15 cm的6 cm回盲肠段，用于组织病理学检测。
结果:TNBS组山羊在7天表现出黏液样便或血性稀便、行动迟缓、体重减轻、回肠组织肉眼和显微病理学积分以及MPO浓度显著增加。显微镜下观察， VH组和假针组山羊在22天可见轻微回肠炎症，而电针组山羊没有回肠炎变化。与VH组相比，EA组山羊对各种CRD刺激表现较低的VMR。电针具有累积效应，电针组山羊在第16天80(P＜0.05)和100 mmHg(P＜0.01)扩张压力下VMR减弱;于第19天和22天，40、60、80和100 mmHg扩张压力下VMR均下降(P＜0.01)。重复电针处理显著抑制脊髓PAR-2、 CGRP和c-Fos表达。
结论和临床关联:TNBS注射到回肠透壁，成功诱导了回肠炎。电针通过下调PAR-2，调节在脑-肠轴伤害性刺激的脊髓传输中的CGRP和c-Fos共表达。电针刺激治疗表现了显著的抗超敏效果。重复电针疗法可能有效地治疗IBDs，IBS等功能性肠病引发内脏过敏。