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超长链脂肪酸延伸酶6(elongase of very long chain fatty acids6，ELOVL6)主要催化C12-C16饱和或单不饱和脂肪酸的延伸，是长链脂肪酸延长反应的限速酶。本实验利用反转录PCR(RT-PCR)技术克隆奶山羊ELOVL6基因的编码（CDS）区；并构建ELOVL6基因的重组腺病毒超表达及干扰载体，包装出高滴度的腺病毒；病毒液感染奶山羊原代乳腺上皮细胞后，研究ELOVL6基因超表达或干扰后对细胞中脂肪酸组成、甘油三酯（TG）含量及脂滴积累的影响，为该基因在奶山羊脂肪酸代谢中的功能研究提供试验依据。本研究获得的结果如下：（1）利用RT-PCR技术克隆得到ELOVL6基因的CDS区序列，长度为795bp(GenBank登录号:KF667508)，共编码264个氨基酸。同源性分析发现，奶山羊ELOVL6基因CDS区核酸序列与牛(Bos taurus)、大鼠(Mus musculus)和人(Homo sapiens)的同源性分别为97%、90%和93%，氨基酸序列的同源性分别为99%、92%、95%。利用TMpred对ELOVL6蛋白跨膜结构预测分析，发现该蛋白有5个跨膜区，保守的组氨酸模体(HXXHH)位于ELOVL6蛋白的第二与第三跨膜螺旋间。ELOVL6蛋白质疏水性预测显示该蛋白总体具有较强的疏水性。（2）组织表达分析显示，ELOVL6基因在奶山羊脂肪、肠、肺脏和肌肉等10个组织中均有表达，在各组织中的表达水平差异较大，在脂肪组织中表达量最高，小肠次之，心脏中表达量最低。（3）将ELOVL6基因连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV上并线性化，转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的E.coli BJ5183感受态细胞中进行同源重组，成功的获得了重组质粒pAdEasy-HA-ELOVL6，转染HEK293细胞对重组腺病毒进行包装、扩繁。利用LaSRT测得第三代病毒的滴度为108U/mL。重组腺病毒感染乳腺上皮细胞48h后，ELOVL6基因的mRNA的表达量升高200倍。ELOVL6基因超表达后，细胞中C16:0和C16:1减少，C18:0和C18:1增多，C16脂肪酸的延伸指数及C16:1与C18:1总去饱和指数均显著升高；该基因超表达抑制细胞内TG水解，增加细胞内TG含量，但对细胞中脂滴积累没有影响。（4）根据ELOVL6基因，设计4条靶向该基因不同序列的shRNA（shRNA-620、shRNA481、 shRNA360、 shRNA306），退火后连接到腺病毒穿梭载体pENTR/CMV-GFP/U6上，与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST通过LR反应进行同源重组，成功的获得了重组质粒pAdEasy-shRNA，转染HEK293细胞对重组腺病毒进行包装、扩繁。利用LaSRT测得表达shRNA-620、shRNA481、shRNA360、shRNA306的重组腺病毒的滴度分别为109U/mL、109U/mL、108U/mL、109U/mL。在乳腺上皮细胞中感染重组腺病毒（表达shRNA-481）48h后，ELOVL6基因的mRNA水平下调了80%。ELOVL6基因干扰后，细胞中C16:0和C16:1增多，C18:0和C18:1减少，C16脂肪酸的延伸指数及C16:1与C18:1总去饱和指数均显著降低；ELOVL6基因干扰后抑制细胞内TG合成，减少细胞内TG含量，但对细胞中脂滴积累没有影响。综上所述，本研究克隆得到奶山羊ELOVL6基因的CDS区。在奶山羊乳腺上皮细胞中，ELOVL6基因催化C16脂肪酸延伸为C18脂肪酸，影响细胞中的单不饱和脂肪酸生成及TG的含量，但对细胞中脂滴积累没有影响，本研究为该基因的功能研究提供了试验依据。