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目的:观察烟草烟雾提取物对气管上皮HBE细胞Akt信号通路和溶酶体ClC-3氯通道蛋白表达的影响;初步明确烟草烟雾下调ClC-3表达致气管上皮细胞自噬流阻滞的机理。方法:1.利用改进的注射器驱动装置燃烧香烟获得烟草烟雾提取物。2.蛋白质免疫印迹法检测烟草烟雾提取物调节气管上皮细胞ClC-3蛋白的相关通路蛋白表达。3.细胞免疫荧光法检测烟草烟雾提取物对气管上皮细胞ClC-3蛋白表达及Akt蛋白磷酸化的影响。4.蛋白质免疫印迹法进一步确认烟草烟雾提取物对气管上皮细胞ClC-3蛋白表达及Akt蛋白磷酸化的影响。5.细胞免疫荧光法检测烟草烟雾提取物对气管上皮细胞CREB蛋白表达的的影响。6.溶酶体红色荧光探针检测ClC-3表达变化对溶酶体酸性环境的影响。7.细胞免疫荧光双标自噬体标记蛋白LC3B和溶酶体标记蛋白Lamp1,荧光显微镜观察烟草烟雾提取物对细胞自噬流中自噬体和自噬溶酶体融合的影响。结果:1.烟草烟雾提取物下调气管上皮HBE细胞ClC-3蛋白表达下调的同时抑制Akt蛋白的磷酸化。2.Akt信号通路抑制剂哌立福新抑制HBE细胞Akt磷酸化的同时下调ClC-3蛋白的表达。3.Akt信号通路激活剂SC79促进HBE细胞Akt磷酸化的同时拮抗烟草烟雾提取物下调ClC-3表达的作用。4.烟草烟雾提取物下调转录因子CREB的表达,派福立新抑制转录因子CREB的表达。5.SC79上调CREB的表达并拮抗烟草烟雾下调CREB表达的作用。。6.烟草烟雾提取物下调HBE细胞溶酶体膜ClC-3的表达。7.烟草烟雾提取物降低HBE细胞溶酶体内的酸度。8.烟草烟雾提取物抑制HBE细胞自噬流中溶酶体与自噬体的融合。结论:1.烟草烟雾提取物抑制Akt蛋白的磷酸化进而通过转录因子CREB下调ClC-3蛋白的表达。2.烟草烟雾提取物下调溶酶体膜ClC-3蛋白表达使溶酶体内酸度降低,引发自噬体与溶酶体融合障碍致自噬流流阻滞。