【摘 要】
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头孢霉DT06是本实验室从蓝藻中分离出来的一株内生真菌。前期研究表明该真菌不但能够分泌大量的胞外多糖,同时还能产生抑制金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等多种革兰氏阳性细
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头孢霉DT06是本实验室从蓝藻中分离出来的一株内生真菌。前期研究表明该真菌不但能够分泌大量的胞外多糖,同时还能产生抑制金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等多种革兰氏阳性细菌的物质。本文主要针对菌株DT06产生的抑菌活性物质进行研究,主要研究结果如下: 在对头孢霉DT06产抑菌物质优化的实验中,确定最佳碳源为蔗糖,氮源为蛋白胨,但研究发现该菌株不能利用硝酸铵、硝酸钠作为氮源合成抑菌物质。氨基酸对抗生素影响实验中,亮氨酸、缬氨酸能有效促进抗生素的合成,最佳浓度分别为1.0g/L和2.0g/L;蛋氨酸、半胱氨酸的加入不但抑制菌体细胞生长,而且阻碍原有抑菌物质合成。在培养条件单因素实验和正交设计实验中,确定最佳发酵条件组合为:接种量为1%,pH为6.5,装液量为60/250ml,加入搅拌玻璃珠为9个。优化后抑菌物质的产量提高约79%。 通过对菌株DT06的发酵液进行处理,确定了醇沉法能够有效去除多糖杂质,活性炭可以吸附发酵液中的色素。对于抑菌活性物质的分离提取主要采用双水相法、硫酸铵沉淀法和大孔树脂吸附法。聚乙二醇/硫酸铵双水相体系中两种物质的质量分数为11%/23%时分离效果最好。当硫酸铵的最佳饱和度为30%时,可用来除去发酵液中的杂蛋白,继续追加硫酸铵饱和度为90%可对抗生素物质进行有效沉淀。大孔树脂筛选实验确定CT-12型树脂对抑菌物质的处理效果最好,不仅在有效分离的同时也不引入新的杂质。 抑菌物质pH、温度、储存稳定性试验表明,该物质在中性或碱性条件下稳定,酸性条件下易分解;该物质在90℃以下稳定,并且当温度为50℃时活性有所提高;该物质在4℃冰箱中能够稳定存储45d,随着存储时间延长抑菌活性略有下降。茚三酮、双缩脲显色反应呈阳性,表明含有游离α-氨基和肽键;在214nm处最大紫外吸收峰。
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