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癌症严重威胁人类健康,已经成为人类的主要致死原因之一。基因治疗是一种新型的抗肿瘤疗法,其效果取决于携带基因的载体及其携带的治疗基因。成熟的载体病毒体系有溶瘤腺病毒及溶瘤痘苗病毒等,其体系已经较为成熟。另外本课题组做了掌叶半夏凝集素对肿瘤细胞产生的细胞毒性作了一定的研究,结果提示在凝集素家族存中存在有效的肿瘤治疗基因,因此几年来本课题组选用了植物凝集素和海洋动物凝集素作进一步的研究。然而,到目前为止还未选择人源凝集素基因进行肿瘤基因治疗,因此本课题选择了人源C型凝集素CLEC2A这一基因。CLEC2A作为NK细胞表面受体的配体,还有可能激活机体自身的自然杀伤NK细胞。本课题将CLEC2A基因与真核表达载体pEGFP-C1一起构建重组质粒pEGFP-CLEC2A-C1,将该重组质粒转染到人肝癌细胞系7404、7721和Hep3B细胞中,观察该基因对肿瘤细胞的毒性,结果显示,EGFP-CLEC2A融合蛋白的表达使细胞发生皱缩,提示CLEC2A的表达对肿瘤细胞有一定的毒性。pEGFP-CLEC2A-C1与重组质粒pCDNA3.1+-dsRED-PRMT5共转染,观察CLEC2A与PRMT5的定位。结果发现,CLEC2A与PRMT5存在共定位,提示它们之间有相互作用。此外,利用Adeasy系统包装了携带人源CLEC2A表达框的非复制型腺病毒AD-Flag-CLEC2A,经鉴定无野生型病毒,MTT法体外检测重组溶瘤腺病毒对7721、DU-145、Hep3B和K562肿瘤细胞的杀伤效果,结果表明携带CLEC2A基因的溶瘤腺病毒病毒对细胞有一定的杀伤作用。我们进一步将CLEC2A构建到p CB质粒中,并与野生型痘苗病毒在293A细胞内进行重组,获得重组溶瘤痘苗病毒OncoPox-Flag-CLEC2A,在鉴定无野毒的情况下,MTT法体外测验重组溶瘤腺病毒对7721、DU-145、Hep3B和K562肿瘤细胞的杀伤效果,结果表明携带CLEC2A基因的溶瘤痘苗病毒病毒对细胞有较强的杀伤作用,并且其杀伤效果较溶瘤腺病毒更明显。利用前列腺癌DU-145细胞初步探索了AD-Flag-CLEC2A在肿瘤细胞内的杀伤机理,Western blot结果显示AD-Flag-CLEC2A增强了Caspase3和PARP的剪切,提示CLEC2A的表达诱导肿瘤细胞凋亡。综上所述,在细胞内过表达CLEC2A基因,可以导致细胞死亡,细胞内与CLEC2A发生相互作用的蛋白质可能有PRMT5,其引起细胞死亡的原因可能是激活Caspase途径,引起细胞凋亡。对于在体内能否起到激活机体自身NK细胞的作用,还有待进一步的动物水平的研究。