血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF),是胚胎发育、骨骼生长、损伤修复正常性过程中的关键调节因子,也与多种病理过程如肿瘤血管生成相关,其中VEGF165是最重要的亚型。癌症相关VEGF能够促进瘤体血管生成,为肿瘤细胞生长、分裂提供营养,也促进肿瘤细胞干细胞化和分化,增强肿瘤侵袭能力、转移能力和存活率。靶向VEGF药物在临床治疗肿瘤和眼底黄斑疾病的过程中已经使众多患者获益,研究开发靶向VEGF的新疫苗新,能够进一步降低使用成本,扩大阻断VEGF药物治疗人群,具有重要的社会意义。本论文在实验室徐爱章博士研究靶向VEGF结构域抗原疫苗的基础上,设计VEGF的表位疫苗。首先选取了VEGF三个优势表位,利用基因突变的方法将VEGF表位替换白喉毒素跨膜区(DTT)的291-296区,构建了三个表位疫苗抗原蛋白,在大肠杆菌原核系统中表达、纯化,制备得到表位疫苗抗原蛋白,设计进行动物实验免疫Balb/C小鼠,测试其免疫原性和抗体中和VEGF的能力。利用同源重组技术构建了VEGF165全长基因载体,在E.coli菌株中进行表达,使用纯化得到E.coli-VEGF165蛋白和购买的Human-VEGF165蛋白作为检测抗原,进行ELISA实验检测小鼠血清的抗体效价,评价表位疫苗的效果。用E.coli-VEGF165包被进行检测三组血清,结果显示都有很高的抗体滴度;但用Human-VEGF165包被检测,只有VEGF-III表现出一定抗体滴度,达到1×10~5,证明设计的表位疫苗抗原VEGF-III能引起小鼠体内的免疫反应,具有中和人VEGF活性;E.coli-VEGF165蛋白,缺乏真核系统蛋白表达后的修饰过程,提示靶向人体蛋白时,抗原的制备、免疫和检测,需要提前考虑论证实验设计。免疫1个月后小鼠抗血清中的抗体下降为免疫1周后水平的80%,随后抗体滴度缓慢下降,一段时间后仍能维持一定的水平。VEGF-III免疫小鼠之后,小鼠体内主要进行Th2型免疫应答,激活B细胞进行免疫反应。综上,VEGF-III表位疫苗可以引起小鼠体内有效的免疫应答,是一个成功的候选VEGF靶向疫苗抗原。