副猪嗜血杆菌(HPS)是猪格拉泽氏病的病原菌,可以引起多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎,给猪群造成较高的发病率与死亡率。虽然目前血清分型鉴定了副猪嗜血杆菌的15个血清型,但仍然存在大量的不可分型菌株,这极大地限制了流行病学及种群结构分析,有必要通过MLST等基因分型方法对我国副猪嗜血杆菌进行分类。细菌生物被膜是造成副猪嗜血杆菌定植及耐药的主要原因,密度感应系统调控生物被膜的形成,可能与副猪嗜血杆菌的致病机制相关,而目前尚未有对于副猪嗜血杆菌密度感应系统的报道,故对副猪嗜血杆菌密度感应系统信号分子的研究有助于揭示该菌的致病机制。本研究对50株副猪嗜血杆菌田间分离株和15株参考株进行了MLST分型,共发现了26个新的等位基因序列和29个新的ST型,这极大地丰富了副猪嗜血杆菌MLST数据库。BURST分析表明副猪嗜血杆菌缺乏稳定的种群结构,具有较高异质性;ST型与地理位置之间也不存在关联。UPGMA系统发育树将所有的菌株分为两大组,A组和B组,存在于A组的菌株所属的血清型基本为无毒或弱毒,B组趋向于强毒菌株。利用密度感应系统Ⅰ型信号分子报告菌CV026和KYC55,对生物被膜形成能力较强的副猪嗜血杆菌田间分离株H19是否产生AHL类信号分子进行了定性检测,进而利用HPLC-MS-MS对副猪嗜血杆菌H19培养上清中存在的Ⅰ型信号分子进行鉴定,发现副猪嗜血杆菌所合成的Ⅰ型信号分子共有两种,其相对分子质量与C10-HSL和C12-HSL相同,但结构不同,由于确定其结构需要进行大量提取纯化,而H19产生的信号分子量极少,因此未能对其结构作进一步鉴定。儿茶酸具有抑制密度感应机制的作用,儿茶酸对副猪嗜血杆菌生物被膜形成的试验结果表明,儿茶酸使副猪嗜血杆菌H19生物被膜形成能力降低25.4%。利用自杀质粒pK18mobsacB通过同源重组方法,成功构建了副猪嗜血杆菌H19的ΔRbsB基因缺失突变株及其回复株,并进行了生物被膜形成能力检测,发现ΔRbsB基因缺失突变株生物被膜形成能力降低,而回复株生物被膜形成能力有所提升,初步确定RbsB基因与生物被膜形成有关。