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实验背景家族性皮质肌阵挛震颤性癫痫(Familial cortical myoclonic tremor with epilepsy,FCMTE)是一种罕见的神经系统常染色体显性遗传疾病,又称良性成人家族性肌阵挛性癫痫(Benigh adult familial myoclonic epilepsy,BAFME),成年期发病,主要表现为四肢细微震颤或肌阵挛,以远端为著,伴或不伴癫痫发作,情绪紧张、光刺激或睡眠剥夺时易被诱发,抗癫痫药物可有效控制癫痫发作,而饮酒或使用β受体阻滞剂治疗无效,病程为非进展性。躯体诱发电位显示肌阵挛或震颤来源于大脑皮质。迄今,已有一百多个FCMTE家系被报道,以日本和意大利两国居多,我国所做的相关报道屈指可数。其发病机制尚不明确,可能与离子通道缺陷有关,也有人认为可能与小脑-丘脑-皮质投射环路中GABA受体的缺陷导致皮质的兴奋性增高有关。目前,国内外遗传分析已经发现了5p15.31-p15、2p11.1-q12.2、3q26.32-3q28、8q23.3-24.1和10p15等多个该病致病基因位点,并且已经对DRPLA基因、CSMD3基因、ACMSD基因等多个候选基因进行研究,但目前仍未发现该病的致病基因。虽然我国对该病的遗传学研究有个别报道,却也只是凤毛麟角。实验目的我实验室对临床发现的一个拟诊的家族性皮质肌阵挛震颤性癫痫大家系进行临床特点分析和遗传学特征研究,尝试定位或发现这一家系的致病基因,探讨疾病的发病机制和识别疾病的易感基因,从而对风险人群生活方式及环境因子进一步调整和干预,有利于指导该病的临床治疗。实验方法与家系成员沟通,征得受试者同意(签订知情同意书)后,收集相关临床信息,主要包括病史采集、体格检查及相关辅助检测,对收集结果进行综合分析,总结该家系的临床特点,确定其遗传方式并绘制受试者的家系图谱。采FCMTE家系患病成员及健康对照者外周静脉血,利用血液基因组DNA提取试剂盒提取拟诊的FCMTE家系受试者基因组DNA,选择STR多态性标记物,针对国内外已报道的5个染色体区段(2p11.1-q12.2、5p15.31-p15、8q23.3-q24.1、3q26.32-3q28及10p15对应短臂2-8M区段)进行连锁分析,明确上述染色体区段中是否存在该FCMTE家系的致病基因位点。最后应用聚合酶链式反应(PCR)以及PCR产物测序法,对先证者BASP1基因、SEMA5A基因和CTNND2基因进行初步筛查,明确上述基因是否存在突变,从而推测其是否可能为该家系的致病基因。实验结果根据详细的病史采集、体征及辅助检查结果确定我们发现的家系为家族皮质肌阵挛性癫痫家系。该家系4代46人中,8例患病(女6例,男2例),1例(男)可疑,大部分患者伴随头痛症状。该家系患病成员符合FCMTE的诊断标准:呈常染色体显性遗传;有成人发病倾向;呈良性病程;表现为四肢远端的震颤或肌阵挛运动,以双手为著;伴随癫痫发作,表现为强直-阵挛发作;服用β受体阻滞剂或酒精治疗无效,应用抗癫痫药物有效;神经电生理检查提示震颤或阵挛来自大脑皮质。将家系受试者就国内外已报道的候选染色体片段进行STR多态性标记物连锁分析发现,选择多个STR标记分别对2p11.1-q12.2、3q26.32-3q28、8q23.3-q24.1、10p15对应短臂2-8M区段进行连锁分析时,当θ=0.0时,LOD值均小于-2,从而否定连锁,说明上述4个染色体区段不是我们所研究的FCMTE家系的致病基因位点。选择12个STR标记针对5p15.31-p15进行连锁分析,结果显示其中两个STR标记即D5S1957和D5S2095在θ=0.0时,LOD值分别为2.16和1.34,支持致病基因位于该区段。应用聚合酶链式反应(PCR)及PCR产物测序法,对先证者BASP1基因、SEMA5A基因和CTNND2基因进行初步筛查时,BASP1基因PCR未扩增出相应产物,故不能对该基因进行突变检测。而对SEMA5A基因和CTNND2基因PCR扩增产物测序的结果均未发现明确的突变。实验结论通过对家系的临床特点综合分析明确了此家系为FCMTE家系,利用基因连锁分析方法,将其致病基因位点初步确定为5p15.31-p15染色体区段。但目前该家系未发现位于5号染色体上的SEMA5A基因和CTNND2基因存在突变。因FCMTE具有遗传异质性,是否会有其他的致病基因位点或致病基因仍是亟待进一步解决的难题。但此家系的发现为探索FCMTE的发病机制提供了一份很好的研究资料。