甘油二酯(DAG)是一种重要的功能性油脂,具有抑制肥胖,降低餐后血糖等功能。本文以大豆油脂肪酸(FFA)和甘油(Gly)为原料,经磷脂酶A1(Lecitase Ultra)催化酯化反应制备DAG。建立了高温气相色谱分析油脂样品中FFA和甘油酯的方法,并通过一次分子蒸馏纯化粗DAG,得到了高纯的DAG产品。利用单因素和响应面实验优化反应条件。研究反应时间(2-10 h),加水量(2-14 wt-%底物质量),加酶量(10-120 U/g底物质量),反应温度(30-70℃)和底物摩尔比Gly:FFA(0.5-2.5)对酯化率的影响。得出最佳反应条件为：反应温度40。C,加水量8 wt-%,反应时间8 h,底物摩尔比(Gly:FFA)2.2：1,加酶量90 U/g。在此反应条件下,脂肪酸酯化率为81.12%,DAG的含量为37.62%。建立了高温气相色谱分析油脂样品中FFA和甘油酯的方法,经过优化,甘油酯总分析时间缩短到10 min以内。保留时间定性,外标法定量,定性定量准确。得到FFA、单甘酯(MAG)、DAG、TAG的气相色谱分析的标准曲线,在质量浓度范围0.5～20.0 mg/mL内峰面积与被测物浓度线性关系良好。通过加样回收试验表明,平均加样回收率在95.69-105.78%之间,RSD在0.27～2.98%之间。酯化反应混合液经过静置分层,得到含有DAG的油层。采用分子蒸馏法除去油层中未反应的FFA和副产物MAG,170。C蒸馏柱温下得到DAG产品,纯度为83.1%,得率为42.7%。同时测定了分子蒸馏重相和轻相中DAG的含量及脂肪酸组成。