论文部分内容阅读
目的：采用定量蛋白质组学技术,从全景式角度筛选与鼻咽癌发生和转移相关的甲基化失活基因,为揭示鼻咽癌浸润转移机制、加强鼻咽癌的防治以及提高鼻咽癌患者的治疗效果和生存率提供重要的理论依据和科学基础。方法：首先采用MTT法和流式细胞术筛选去甲基化药物5-aza-2’-dC作用于高转移潜能鼻咽癌细胞5-8F的最佳作用浓度和最佳作用时间。采用iTRAQ定量蛋白质组学技术对三种蛋白样本(甲基化抑制剂处理的5-8F细胞,对照组未处理的5-8F细胞和对照组6-10B细胞)进行差异标记,结合二维液相色谱串联质谱分析对标记的蛋白样本进行分离鉴定,找出表达差异的蛋白质。采用spssl3.0统计软件进行统计学分析。结果：通过MTT和流式细胞术得出,经过不同浓度的5-aza-2’-dC (0、1、2、5、10μmol/L)处理5-8F细胞后,细胞生长曲线出现明显抑制,细胞阻滞在S期和G2-M期。当浓度为5μmol/L、作用5-8F细胞4天时,其对于细胞的增殖、细胞周期的阻滞和细胞凋亡的效果最佳。本实验经过质谱分析总共得到49876个多肽片段,通过ProteinPilot软件查询了40496个蛋白,最终发现了7种差异蛋白。通过对5-8F细胞和6-10B细胞的相对蛋白量表达进行分析目前共鉴定出7种差异蛋白,它们包括RCHY1蛋白、RNA结合蛋白27等,而且在5-8F细胞中的表达均降低。通过对5-aza-2’-dC处理组5-8F和未处理组5-8F细胞的相对蛋白量表达分析发现血清蛋白、核孔蛋白Nup85在甲基化抑制剂处理的5-8F细胞中表达上调,而RCHY1蛋白、RNA结合蛋白27等五种蛋白表达下调结论：1.甲基化抑制剂5-aza-2’-dC具有抑制鼻咽癌细胞5-8F生长增殖,使细胞发生G2-M期和S期双期阻滞并介导细胞凋亡的作用,并且具有一定的剂量依赖性。5-aza-2’-dC浓度5μmol/L、作用时间为4天时,其对于5-8F细胞的增殖、细胞周期的阻滞和细胞凋亡的效果最佳。2.采用iTRAQ技术对甲基化抑制剂未处理组细胞5-8F和6-10B蛋白表达差异进行鉴定,目前发现了RCHY1, RNA结合蛋白27等7个差异蛋白,它们均在5-8F细胞中表达下调。结果表明多个蛋白表达量的变化参与了鼻咽癌的浸润转移机制。3.采用iTRAQ方法对甲基化抑制剂处理组5-8F和未处理组5-8F细胞的蛋白表达差异进行鉴定,发现在处理组5-8F细胞中RCHY1蛋白等五种蛋白表达下调。而在处理组5-8F细胞核孔蛋白Nup85在经过甲基化抑制剂作用后表达得以恢复,结合5-8F细胞与6-10B细胞比较结果,这表明Nup85基因有可能是与鼻咽癌转移相关的甲基化失活基因,但具体作用机制有待进一步研究。