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褪黑素（melatonin, MLT）作为松果体分泌的一种激素,不仅参与昼夜节律的调节,同时也作用于免疫系统,对免疫器官、免疫细胞、免疫分子发生作用,进而影响免疫功能的调节。MLT分泌进入血液后主要与其特异性受体（melatonin receptor, MR）结合而产生生物学效应。1998年IU PHAR会议,将人和其他哺乳动物的受体命名为MT1,MT2,MT3三种亚型。MT1、MT2分别对应于Mel la、Mel lb旧称,MT3相当于过去的Mel2。CD （cluster of differentiation）通常指白细胞表面抗原分化簇。作为淋巴细胞表面重要的粘附、识别组份,发挥着重要的免疫调节作用。CD69被称为活化诱导分子（activation inducer molecule, AIM）,又名早期活化抗原-l （early activation antigen 1, EA-1）,是C型凝集素受体家族成员,CD69是T细胞早期活化的标志物;CD25是T淋巴细胞表面表达相对较早的标记物,是活化细胞所具有的抗原;人白细胞DR抗原（human leukocyte antigen DR, HLA-DR）是MHC-Ⅱ类分子的主要抗原之一,HLA-DR在静息的T细胞中有低水平表达,刺激后上调较慢且较低,是T细胞活化晚期表达抗原,且表达恒定。因此,可将CD25、CD69、HLA-DR看作T细胞活化过程的分子标记物,用于评估T细胞的活化情况。CD4+ T细胞是一类辅助型T细胞（T helper cell, Th）,具有重要的免疫调节功能,其活化对免疫进程具有关键作用,对很多临床免疫性疾病具有诊断和治疗意义。褪黑素可影响辅助型T细胞的转化,继而影响细胞因子的分泌。然而,褪黑素在T细胞活化过程中具有何作用,相关研究尚待明确。目的:探讨褪黑素对成人CD4+T细胞活化的影响及其膜受体的作用。方法:1.褪黑素对CD4+ T细胞活化的作用及其最适作用浓度的确立随机选择10个正常、健康成年人,每人采集外周血10 ml （n=10）,分离、获取淋巴细胞,依据所给MLT浓度不同每份标本分成4组:分别加入的MLT浓度为0、100 pM、500 pM、和1 nM,每组均加入对氯苯丙氨酸（parachlorophenylalanine,PCPA） 10μM,以抑制淋巴细胞MLT的内源性合成,并在8μg/ml植物凝集素（phytohemagglutinin, PHA）刺激下培养。于20 h后取部分培养细胞用流式细胞仪测定CD4+CD69+细胞占CD4+ T细胞的百分比;72 h后取剩余部分细胞用流式细胞仪测定CD4+CD25+和CD4+ HLA-DR+细胞占CD4+ T细胞的百分比。经配对资料t-test统计分析数据,以明确褪黑素有无刺激作用,这种作用有无明显量效关系,最终确定褪黑素合适的作用浓度。2.褪黑素受体拮抗剂对MLT所致CD4+ T细胞活化变化的影响另外随机采集27个正常、健康成年人外周血,每人10 ml （n=27）,分离、获取淋巴细胞,按处理因素不同每份标本分成5组:第一组空白对照组;第二组褪黑素（MLT, 1 nM）组;第三组2-苯基-N-乙酰色胺（lzindole, LZI, MT1、MT2非选择性拮抗, 10μM） +MLT（1 nM）组;第四组盐酸哌唑嗪（prazosin hydrochloride, PRZ, MT3拮抗剂, 20.4 nM）+MLT （1 nM）组;第五组LZI（10μM）+PRZ（20.4 nM）+MLT（1 nM）组。每组均加入PCPA（10μM）,以抑制淋巴细胞MLT的内源性合成,并在PHA（8μg/ml）刺激下培养。于20 h后取部分培养细胞用流式细胞仪测定CD4+CD69+ T细胞占CD4+ T细胞的百分比和平均荧光强度（mean fluorescence intensity, MFI）;72 h后取剩余部分细胞用流式细胞仪测定CD4+CD25+和CD4+ HLA-DR+ T细胞占CD4+ T细胞的百分比和MFI。经方差分析（ANOVA）检验统计分析数据,旨在观察MLT及其受体拮抗剂对CD4+ T细胞活化的影响。结果:1.在PCPA抑制淋巴细胞内源性MLT合成和PHA的刺激下,外源性褪黑素能使得CD25+、CD69+、HLA-DR+的CD4+ T细胞表达的百分比分别显著增加（P<0.05）,且上述细胞的百分比随着褪黑素浓度升高而增加（P<0.05）;2.各实验组之间CD4+CD25+ T细胞、CD4+CD69+ T细胞和CD4+HLA-DR+ T细胞群体的MFI无明显差别（P>0.05）;3. LZI能有效抑制褪黑素增强CD4+ T细胞活化的作用（P<0.05）,而PRZ不能抑制该作用（P>0.05）。结论:1.外源性褪黑素能有效地增强PHA对成人CD4+ T细胞的活化作用,并且褪黑素的这种作用存在着量效关系。2.褪黑素并不能增加已活化的CD4+ T细胞表面CD25、CD69、HLA-DR分子表达的数量。3.褪黑素的这种增强CD4+ T细胞活化作用是通过MT1/MT2而非MT3膜受体起作用。