【摘 要】
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癌症是威胁人类生命健康的主要疾病之一,随着科学技术的发展,癌症逐渐成为一种可控可愈的“慢性病”。癌症的早期诊断对癌症的治疗起到至关重要的作用。肿瘤细胞的存在常常使纤维蛋白在组织中不正常的沉积,进而导致组织栓塞和损伤,并为癌症的生长和转移提供桥梁。所以将纤维蛋白作为肿瘤标志物,实现癌症的早期诊断。本工作以纤维蛋白为研究对象,基于双功能性DNA纳米酶建立了高灵敏度、高选择性检测纤维蛋白的新方法,主要分
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癌症是威胁人类生命健康的主要疾病之一,随着科学技术的发展,癌症逐渐成为一种可控可愈的“慢性病”。癌症的早期诊断对癌症的治疗起到至关重要的作用。肿瘤细胞的存在常常使纤维蛋白在组织中不正常的沉积,进而导致组织栓塞和损伤,并为癌症的生长和转移提供桥梁。所以将纤维蛋白作为肿瘤标志物,实现癌症的早期诊断。本工作以纤维蛋白为研究对象,基于双功能性DNA纳米酶建立了高灵敏度、高选择性检测纤维蛋白的新方法,主要分为三个部分:一、基于双链DNA麻绳结构降低背景吸附高灵敏检测纤维蛋白利用双链DNA麻绳结构降低背景吸附作用,结合归巢肽CREKA的特异性识别,建立了一种高灵敏检测纤维蛋白的新方法。首先设计了一条双链DNA,一端可以折叠形成G-四聚体结构,另一端连接归巢肽CREKA。由于其双链结构,不容易产生非特异性吸附,降低背景信号,提高体系的灵敏度。通过G-四聚体-血红素核酸酶,催化鲁米诺（Luminol）体系产生化学发光信号。在最优的实验条件下,该体系线性回归方程为I=4071.14+64.68 c（c是纤维蛋白的浓度,p M）,线性范围为1.12-112 p M,其线性相关系数R=0.9981,该方法测得的检出限为0.085 p M。该方法为检测纤维蛋白提供了新的思路。二、基于杂交链式反应构建双链DNA纳米线高灵敏检测纤维蛋白本工作在上个工作“基于双链DNA麻绳结构降低背景吸附高灵敏检测纤维蛋白”的基础上,引入杂交链式反应（HCR）,构建了一种高灵敏检测纤维蛋白的新方法。首先设计了DNA发卡H1和H2,其中部分DNA序列可以进行杂交,末端序列可以折叠形成G-四聚体结构。通过杂交链式反应,形成具有多个G-四聚体结构的双链DNA纳米线,该探针分子可识别纤维蛋白,进而催化鲁米诺产生强烈的化学发光信号。体系的线性回归方程为I=5863.36+125.71 c（c是纤维蛋白的浓度,p M）,线性范围为0.14-72.5 p M,其线性相关系数R=0.9993,该方法测得的检出限为0.012p M。与上个工作相比,试剂用量少,灵敏度提高。三、基于归巢肽识别作用构建类夹心酶联免疫法双选择性检测纤维蛋白本工作通过在酶标板上包被纤维蛋白抗体,对纤维蛋白进行一级选择,纤维蛋白存在时,纤维蛋白抗体与纤维蛋白作用,通过洗板过程使其余蛋白被洗脱。以归巢肽CREKA为识别分子的双链DNA探针对纤维蛋白进行二级选择。通过这两次选择,极大地提高了体系检测纤维蛋白的选择性。在最优的实验条件下,该方法的线性回归方程为I=3399.39+62.33 c（c是纤维蛋白的浓度,p M）,线性范围为0.87-145 p M,其线性相关系数R=0.9991,该方法测得的检出限为0.061 p M。
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