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获得性免疫缺陷综合症（acquired immunoceficiency syndrome，AIDS）是当今世界影响最大，危害也最大的疾病之一，它的防治迫在眉睫。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是AIDS的病原体，其中编码核心蛋白的gag基因是HIV基因中最保守的一段。含有p24和p17的核心蛋白，又称Gag蛋白具有一定的抗原性，而且抗Gag蛋白的抗体是HIV感染后可从血液中最早检出的抗体，因此HIV-Gag蛋白对AIDS的检测有着重要的作用。 本文主要是对HIV-gag基因的重组、表达和应用进行了研究。目的 研制HIV抗体诊断试剂。方法 根据从Genbank上查询到的HIV-gag基因的序列，分别设计了上游引物（gagF）：5’-CGGATCCA ATG GGT GCG AGA GCG TCA-3’和下游引物（gagR）：5’-CGGAATTCGT GTC GTT GCC AAA GAG TGA-3’。用聚合酶链反应（PCR）的方法从HIV-1的基因中扩增出gag的DNA。经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后，用T4 DNA连接酶将gag的DNA插入表达载体pTrcHis2 A质粒中，构成重组的gag-pTrcHis2 A质粒。将此重组质粒转化原核表达菌株BL21（DE3）中，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。表达的蛋白用Ni2+亲和层析柱纯化后做SDS-PAGE检测，以及蛋白印迹（Western blot，Wb）和间接ELISA实验的应用研究。结果 SDS-PAGE电泳显示，表达的蛋白相对分子质量为41kD，与预计的值相同；蛋白印迹实验显示，阳性血清和阴性血清的检出符合率分别为100％（10／10）和100％（40／40）；ELISA实验显示，10ng重组的Gag抗原与稀释了100倍的血清反应，阳性血清和阴性血清的检出符合率分别为100％（10／10）和100％（80／80）。结论 所研制的重组Gag蛋白正确表达，而且具有较高的抗原特异性和敏感性，可用于制备HIV抗体诊断试剂。