论文部分内容阅读
【目的】观测血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白(APJ)拮抗剂Apelin13(F13A)对肝纤维化的影响,并探讨其可能的机制。【方法】S-D雄性大鼠随机地分为对照组、肝纤维化模型组和Apelin13(F13A)组。通过腹腔注射四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型。Apelin13(F13A)按100μg/kg体重通过腹腔注射给药8周。采用全自动生化分析检测仪测量血清总蛋白(TPROT),白蛋白(ALB)和球蛋白(GLB)水平等反映肝脏蛋白合成代谢功能的指标以及血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平等反映肝细胞受损情况的指标。采用ELISA法检测反映肝脏纤维化的血清学指标,包括血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、三型前胶原(PcⅢ)和IV型胶原(IV-C)水平。采用ELISA法检测大鼠血清Apelin-36、转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的水平。取肝左叶同一部位,苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏的病理形态学变化。采用实时定量PCR和Western blot检测肝脏中Apelin-36、APJ、TGF-β1、α-SMA及内物质网应激的标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Tribbles同源蛋白3(TRB3)的蛋白表达。【结果】(1)实验8周结束后,对照组的全部大鼠均存活,肝纤维化模型组大鼠死亡5只,Apelin13(F13A)处理组大鼠死亡1只。肝纤维化模型组大鼠毛发枯黄没有光泽,精神状态萎靡,活动明显减少,对外界刺激反应不灵敏,体重明显减轻。对照组大鼠活动自如,没有出现上述现象。Apelin13(F13A)处理组大鼠上述的现象明显减轻,活动较好。(2)与对照组比较,肝纤维化模型组大鼠血清Apelin-36水平及肝脏组织中Apelin-36和APJ m RNA和蛋白的表达均显著升高(P﹤0.05);Apelin13(F13A)处理组大鼠血清Apelin-36水平及肝脏组织中Apelin-36和APJ m RNA和蛋白的表达与肝纤维化模型组比较没有显著性差异(均P﹥0.05)。(3)与对照组比较,肝纤维化模型组大鼠血清的TPROT和ALB水平显著降低(均P﹤0.05),而GLB、ALT和AST水平均显著增加(均P﹤0.05);与模型组比较,Apelin13(F13A)组血清TPROT和ALB水平(均P﹤0.05)显著增加,而血清GLB、ALT和AST水平显著降低(均P﹤0.05)。(4)与对照组比较,肝纤维化模型组大鼠血清的HA、LN、PCⅢ和IV-C水平显著增加(均P﹤0.05)。与模型组比较,Apelin13(F13A)处理显著降低了血清HA、LN、PCⅢ和IV-C水平显著降低(均P﹤0.05)。(5)对照组大鼠肝脏的肝小叶结构完整、肝索和肝血窦以中央静脉为中心呈放射状排列,肝细胞排列整齐,没有发现明显的胶原纤维增生,肝脏组织纤维化程度分级为0级;肝纤维化模型组大鼠肝小叶结构破坏严重,肝细胞排列紊乱,汇管区发现明显的坏死细胞和炎性细胞,汇管区和小叶内可见大量胶原纤维增生,胶原纤维向肝实质内延伸形成纤维纵隔,肝脏组织纤维化程度分级为多为3-4级;与模型组比较,Apelin13(F13A)组大鼠肝脏组织肝细胞变性和坏死明显减少,肝纤维化程度明显减轻,肝脏组织纤维化程度分级多为1-2级。(6)与对照组比较,肝纤维化模型组大鼠血清TGF-β1和α-SMA的水平及肝脏组织中TGF-β1和α-SMA m RNA和蛋白的表达均显著增加(均P﹤0.05)。与模型组比较,Apelin13(F13A)组血清TGF-β1和α-SMA的水平及肝脏组织中TGF-β1和α-SMA m RNA和蛋白的表达均显著降低(均P﹤0.05)。(7)与对照组比较,肝纤维化模型组大鼠肝脏组织中GRP78、CHOP和TRB3m RNA和蛋白的表达均显著增加(均P﹤0.05)。与模型组比较,Apelin13(F13A)组大鼠肝脏组织中GRP78、CHOP和TRB3 m RNA和蛋白的表达水平均显著降低(均P﹤0.05)。【结论】1.APJ拮抗剂Apelin13(F13A)抑制了CCl4诱导的大鼠肝纤维化。2.其机制可能与Apelin13(F13A)降低TGF-β1的表达及抑制内质网应激有关。