论文部分内容阅读
目的:顺铂(顺氯氨铂Ⅱ,amminedichloroplatinum Ⅱ,CDDP)是目前一线化疗药物中最有效的药物之一,广泛应用于多种恶性肿瘤,尤其是宫颈癌(Cervical Cancer,CC)的治疗。但我们发现在治疗过程中癌细胞会逐渐对顺铂产生不同程度的耐药,后期的化疗效果差强人意。本研究的目的是分析探讨宫颈癌细胞对抗顺铂的相关机制,通过分析细胞周期蛋白Ⅰ(Cyclin Ⅰ)的下游蛋白及其本身表达改变后,宫颈癌细胞耐药程度的改变,探讨细胞周期蛋白Ⅰ在顺铂耐药具体过程中发挥的作用,为下一步探讨抑制宫颈癌细胞对顺铂的耐药性打下一定基础。方法:本研究按照年龄和临床分期、病理分期,选取了30例宫颈癌病人的肿瘤组织标本入组。采用实时聚合酶链反应(q RT-PCR)技术分析肿瘤细胞中细胞周期蛋白Ⅰ的表达,应用蛋白印迹试验(Western Blot,WB)检测下游蛋白质分子的表达变化。应用细胞增殖试验及异种移植试验检测顺铂对宫颈癌细胞的毒性变化。慢病毒介导的基因高表达和siRNA介导的基因水平下调被用来观察细胞周期蛋白Ⅰ在宫颈癌耐药过程中的作用。结果:肿瘤细胞中细胞周期蛋白Ⅰ的浓度与顺铂耐药正相关。实验结果证实,化疗期间对顺铂产生耐药的宫颈癌病人中,细胞周期蛋白Ⅰ存在高表达。稳定高表达的细胞周期蛋白Ⅰ使He La细胞对更高浓度的顺铂也产生了抵抗。同时,体外实验证明上调细胞周期蛋白Ⅰ水平能够明显增加体外肿瘤细胞生长速率,体内实验证明上调细胞周期蛋白Ⅰ水平能够增加体内肿瘤细胞对顺铂的耐药性。通过对Cyclin Ⅰ下游分子的检测发现,细胞周期蛋白Ⅰ促进了细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5(Cdk-5)的高表达,而Cdk-5通过阻止宫颈癌细胞系的凋亡达到促进顺铂耐药的作用。与此相一致,在细胞周期蛋白Ⅰ高表达的Hella细胞系中,通过siRNA(Small interfering RNA)的作用减少Cdk5蛋白表达,可以增加肿瘤细胞对顺铂的敏感性。结论:细胞周期蛋白Ⅰ及其下游蛋白质Cdk5与宫颈癌细胞对顺铂的耐药性有关;细胞周期蛋白Ⅰ水平上调激活了Cdk5,而Cdk5通过阻止宫颈癌细胞系的凋亡而促进了宫颈癌细胞对顺铂的耐药发生。