复合骨形态发生蛋白2的不饱和聚磷酸酯成骨材料的合成及体外性能检测

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第一部分目的合成一种新型的可用于组织工程骨的磁性PLGA-BMP2缓释微球并对其各项性能进行检测分析。方法用复乳法合成磁性PLGA-BMP2微球;用扫描电镜观测微球微观形态;用振动样品磁强计检测微球磁性能;用ELISA法检测微球载药量、缓释性能。结果扫描电镜下可见微球呈正圆形,粒径介于10-100um;振动样品磁强计检测结果显示微球具有超顺磁性;微球载药量为1±0.18ng/mg;微球对rhBMP2具有缓释效果。结论合成的磁性PLGA-BMP2微球具有超顺磁性和缓释BMP2的能力,为新型磁性组织工程骨支架的研制奠定了基础。第二部分背景我们前期的研究中合成了一种新型的不饱和聚磷酸酯(unsaturatedpolyphosphoester,UPPE)成骨材料。这种材料合成过程中的理化条件变化较大,可能会对加入其中的生物蛋白因子的活性产生不利影响。目的探讨利用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly (lactic-co-glycolic acid),PLGA)微球,把骨形态发生蛋白2(recombinant humanbone morphogenetic protein-2,rhBMP2)加入到不饱和聚磷酸酯成骨材料中,并保持BMP2生物活性的可行性及效果。方法利用复乳法合成PLGA-BMP2微球。用扫描电镜观测微球微观形态;用激光共聚焦显微镜观测微球上rhBMP2分布;用酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA)法检测微球载药量、缓释性能和微球经45℃处理后rhBMP2活性。将PLGA-BMP2微球加入到不饱和聚磷酸酯成骨材料的合成中,得到新型UPPE-PLGA-BMP2(UPB)成骨材料。用扫描电镜观测UPB的微观结构,用ELISA法检测微球载药量、缓释性能。将体外培养的第三代骨髓间充质细胞(bone marrowmesenchymal cells, BMMCs)种植于UPB表面,通过观察BMMCs的黏附和凋亡情况评估UPB的细胞毒性和生物相容性;通过检测BMMCs的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性评估UPB中的BMP2的生物活性。结果PLGA微球在电镜下显示出中空的球状结构,BMP2分布于PLGA微球的球壁。PLGA微球和UPB对BMP2的释放均具有突释和缓释效应。UBP能够有效黏附BMMCs。新合成的UPB的细胞毒性较大,将其在缓冲液内浸泡至少2小时后其细胞毒性明显减低。种植于UPB表面的BMMCs的ALP活性较对照组明显增强,说明UPB中的BMP2的生物活性存在。结论可以将BMP2通过PLGA-BMP2微球的形式加入到UPB的合成中,并能够在承受其恶劣的合成过程后保持BMP2的生物活性;UPB的细胞毒性较低,能够在体外有效吸附并支撑细胞生长。
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