天花粉蛋白应用于喉癌化疗及机制的研究

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目的:研究天花粉蛋白(trichosanthin, TCS)单独或联合顺铂用于对喉癌(HEp-2细胞株和AMC-HN-8细胞株)增殖抑制,以及研究TCS激活的JNK/MAPK信号通路与其发挥药理作用之间的关系。方法:设立不同的实验组,包括不同浓度TCS组(1、5、9、13μg/ml),低浓度顺铂组(3μg/ml)、高浓度顺铂组(10μg/ml)、及TCS和顺铂联合作用组(5pg/ml TCS和3μg/ml颐铂),阴性对照组;连续5天使用CCK-8法(cell counting kit-8, CCK-8)和乳酸脱氢酶法检测不同实验组对喉癌细胞的抑制作用和细胞毒性;流式细胞仪和Hochest33258染色观察细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测JNK/MAPK,磷酸化JNK/MAPK,核因子κB(nuclear factor κB, NF-κB)、p38磷酸化p38、I-κB及磷酸化I-κB的变化。结果:TCS通过诱导细胞凋亡和细胞周期停滞的方式来抑制喉癌细胞增殖,TCS通过时间和浓度依赖的方式激活JNK/MAPK信号通路,从蛋白水平上阻断JNK/MAPK信号通路,TCS对喉癌细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡的作用减弱,与TCS和低剂量顺铂单独作用相比,TCS和顺铂联合作用可明显抑制喉癌细胞的生长(P<0.01),凋亡细胞数量增加;联合作用组的抑制效果与高浓度顺铂组差异无统计学意义,细胞毒性同TCS和顺铂单独作用相比差异无统计学意义(P>0.05),而毒性低于高浓度顺铂组(P<0.01);Western blot显示顺铂增强NF-κB转录因子活性,抑制JNK信号通路,TCS组主要激活JNK/MAPK信号通路而抑制NF-κB, TCS和顺铂联合作用后磷酸化JNK保持高水平抑制NF-κB活性。结论:TCS通过激活JNK/MAPK信号通路,发挥其抑制喉癌细胞增殖作用,同时抑制NF-κB转录因子活性,增强顺铂诱导喉癌细胞凋亡比例,从而降低其对细胞的毒性并增强其抗肿瘤疗效,为中药天花粉蛋白联合顺铂应用于喉癌临床治疗奠定了实验基础。
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