抗头孢噻呋多克隆抗体和抗氯霉素多克隆抗体制备的研究

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头孢噻呋作为第一个动物专用的头孢菌素类抗生素,由于其在兽医临床上的日益广泛使用,其在动物性食品中的残留也逐渐引起人们的高度关注,快速检测头孢噻呋在动物性食品中的残留成为畜牧生产实践中亟待解决的问题。氯霉素是第一个人工合成的广谱抗生素,因其效高价廉,在我国畜牧业中得到广泛应用,成为畜禽疾病防治的重要药物。随着氯霉素的广泛应用及研究的深入,发现其有许多严重的副作用,因此,必须控制氯霉素在动物性食品中的残留,建立一种快速检测氯霉素残留的方法。本研究采用免疫学技术,成功制备抗头孢噻呋多克隆抗体和抗氯霉素多克隆抗体,并初步建立了检测头孢噻呋和氯霉素在动物性食品中残留的ELISA方法,为其单克隆抗体的制备和试剂盒的开发打下了良好的基础。主要研究内容如下:1成功制备了抗-CEF多克隆抗体1.1采用直接法将头孢噻呋(CEF)与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别合成免疫抗原(CEF-BSA)和检测抗原(CEF-OVA),用紫外(UV)、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行鉴定,并用正交分解法优化了抗原合成过程。1.2用CEF-BSA免疫Balb/c小鼠得到抗CEF多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清的效价为1:135000,间接竞争ELISA测定CEF的标准曲线,线性范围为100 ng/mL-1000 ng/mL,线性方程是y=-2.6x+206.0,相关系数(r)为0.98,IC50是206.0 ng/mL,检测限为49.1 ng/mL,以200 ng/mL-800 ng/mL浓度添加时,牛奶中的回收率为79.2%-94.5%,变异系数为5.1%-13.4%。2成功制备了抗-CAP多克隆抗体2.1将氯霉素(CAP)和琥珀酸酐合成半抗原琥珀酰氯霉素(CAP-HS),然后在碳化二亚胺(EDC)作用下与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别合成免疫抗原(CAP-BSA)和检测抗原(CAP-OVA),用紫外(UV)、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行鉴定,并用正交分解法优化了抗原合成过程。2.2用CAP-BSA免疫家兔和Balb/c小鼠都得到抗CAP多克隆抗体,间接ELISA检测抗血清的效价为1:162000,间接竞争ELISA测定CAP的标准曲线,线性范围为10 ng/mL-100 ng/mL,线性方程是y=-4.3x+32.4,相关系数(r)为0.98,IC50是32.4ng/mL,检测限为0.94ng/mL,以20ng/mL-100ng/mL浓度添加时,鸡蛋中的回收率为79.4%-98.5%,变异系数为0.5%-4.3%。
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