论文部分内容阅读
目的椎间盘退变是脊柱退变性疾病的关键病理基础之一,而炎症和细胞凋亡是椎间盘退变的关键机制。当前的相关研究主要关注中晚期退变椎间盘的修复,而缺少针对椎间盘退变机制的治疗方法。本研究一方面选取藏红花素干预椎间盘退变相关的炎症和细胞外基质降解;另一方面选取白藜芦醇干预椎间盘退变相关的细胞凋亡,研究两者对椎间盘早期退变的作用和相关机制,探讨有效延缓或阻断椎间盘早期退变的药物干预方法。方法1.进行大鼠髓核细胞体外单层和三维培养,给予髓核细胞LPS和藏红花素处理,检测炎症因子的表达、基质降解酶的表达、细胞外基质的含量以及巨噬细胞向髓核细胞的迁移情况,并研究NF-κB通路和MAPK通路的激活情况。2.建立大鼠椎间盘体外器官培养模型,给予LPS和藏红花素处理,进行细胞活性检测、组织形态学观察、免疫组织化学检测和细胞外基质含量检测。3.建立针刺诱导的大鼠尾椎间盘退变模型,椎间盘内注射藏红花素,进行MRI检测、椎间盘退变相关基因表达检测、组织形态学观察、免疫组织化学检测、细胞外基质与DNA含量检测。4.在体外培养条件下,给予髓核细胞硝普钠、白藜芦醇、ROS清除剂、NO清除剂处理,检测细胞增殖活性、凋亡率、凋亡相关标记物、线粒体膜电位、ROS和NO含量;并在椎间盘体外器官培养条件下,给予相同处理,检测髓核细胞凋亡。结果1.在体外培养条件下,藏红花素无明显细胞毒性,通过选择性地抑制JNK通路的激活,显著抑制了LPS诱导的髓核细胞炎症因子的表达升高、基质降解酶的表达升高、细胞外基质的减少以及巨噬细胞向髓核细胞的迁移。2.本研究中的体外椎间盘器官培养体系稳定可靠,藏红花素未见无明显细胞毒性,并可显著抑制LPS诱导的椎间盘细胞外基质的降解。3.椎间盘内注射藏红花素可有效抑制针刺诱导的大鼠椎间盘退变过程中椎间盘细胞外基质的减少,维持椎间盘的正常结构,有效延缓椎间盘早期退变。4.白藜芦醇可通过清除细胞内过量的ROS,抑制硝普钠诱导的髓核细胞凋亡。结论藏红花素可显著抑制椎间盘炎症反应,抑制退变过程中椎间盘细胞外基质的减少;白藜芦醇可通过其抗氧化应激作用,减少退变过程中椎间盘细胞的凋亡;这两种药物分别通过抑制炎症和细胞凋亡延缓椎间盘早期退变。