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随着自由基生命科学研究的快速发展以及人们对氧自由基和疾病关系研究的不断深入,抗氧化剂被应用到食品、保健食品、日用品、化妆品等各个领域。天然产物抗氧化剂安全低毒,且普遍具有抗炎、预防心脑血管疾病、抗菌、抗肿瘤作用等多种生物活性,已成为当前全球范围内研究热点之一。其中,EGCG、葡萄籽原花青素(Grape seed proanthocyanidins,GSP)、二氢杨梅素(Dihydromyricel,DMY)等都是备受关注的天然产物抗氧化剂。研究发现,多种抗氧化功效因子联合使用比单一组分有更好的效果,即呈现协同作用。本文系统地研究了 EGCG、GSP、DMY这三种天然产物在抗氧化、抑制糖尿病相关酶活性以及抑制小鼠乳腺癌4T1细胞增殖方面的协同作用,以期为日常膳食指导以及相关产品开发提供依据。主要研究结果如下:1.选用DPPH、ABTS、羟基自由基三种体外抗氧化模型测定EGCG、GSP和DMY单种物质以及不同比例复配物的抗氧化作用,并采用等辐射分析法对三者的抗氧化相互作用效果进行评价。三种天然产物的抗氧化能力随浓度增大而增强,抗氧化能力从高到低依次为EGCG>DMY>GSP,在三种抗氧化体系下,抗氧化能力排序相同。三种天然产物的复配物呈现最佳抗氧化协同作用的配方依次为:DPPH自由基清除实验中EGCG:GSP:DMY=4.8:1.2:4的组合(协同率为29.28%);ABTS自由基清除实验中EGCG:GSP:DMY=4.8:1.2:4的组合(协同率为15.42%);羟基自由基清除实验中EGCG:GSP:DMY=4:4:2的组合(协同率为55.69%)。2.测定了 EGCG、GSP和DMY单种物质及其不同比例复配物对三种糖尿病相关酶活性的抑制作用,三种糖尿病相关酶分别为α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶以及DPP-IV酶。三种天然产物对α-淀粉酶活性的抑制能力从大到小依次为EGCG>GSP>DMY,对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用为GSP>EGCG>DMY,对DPP-IV酶活性的抑制能力为EGCG>GSP>DMY,三种天然产物在不同的酶体系中表现出不同的抑制能力。研究不同比例复配物对三种糖尿病相关酶活性的抑制作用,发现三种天然产物复配时,呈现一定的协同增效作用。在α-淀粉酶抑制实验中,三种物质组合协同效果最佳的组合为EGCG:GSP:DMY=4:1:5,协同率为25.95%。抑制α-葡萄糖苷酶协同效应最佳的组合是EGCG:GSP:DMY=3.2:4.8:2,协同率为27.69%。在DPP-IV酶抑制实验中,EGCG:GSP:DMY=1.6:6.4:2的组合表现出最佳的协同增效作用,协同率为66.65%。3.采用小鼠乳腺癌4T1细胞作为评价物,评价协同作用的EGCG、GSP、DMY复配物的抗肿瘤活性,进一步探究三种天然产物的协同作用。实验发现这三种天然产物都具有一定的抑制4T1细胞增殖和促进4T1细胞凋亡的作用。其中DMY抑制4T1细胞增殖的能力最强(ICs0=20.05±1.66μg/mL)。将三种天然产物按照不同比例制成复配物,测定复配物对4T1细胞增殖的抑制作用。两两复配时,对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖抑制协同作用最强的组合比例分别为:EGCG:GSP=6:4,协同率为 61.10%;EGCG:DMY=2:8,协同率为 22.64%;GSP:DMY=6:4,协同率为57.10%。当三种天然产物组合时,不同配比都显示出良好的协同增效作用,其中协同率最高的组合为EGCG:GSP:DMY=2.4:1.6:6,协同率为63.99%。4.筛选出对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖抑制协同作用最强的组合,即EGCG-GSP(6:4)、EGCG-DMY(2:8)、GSP-DMY(6:4)、EGCG-GSP-DMY(2.4:1.6:6)四组天然产物复配物,探究其对小鼠乳腺癌4T1细胞的协同抑制效应与机制。发现四组天然产物复配物都能一定程度地阻滞细胞周期,使4T1细胞凋亡率升高,且复配物组合的促凋亡作用效果优于几种天然产物单独作用的效果。四组天然产物复配物都可以使4T1细胞内ROS水平显著增加(p<0.05),且EGCG-GSP-DMY(2.4:1.6:6)组合的作用效果优于三种物质单独作用或者两两复配物的作用效果。小鼠乳腺癌4T1细胞在各组合天然产物复配物的作用下,caspase9和caspase3活性都有所增加,提示诱导凋亡是个组合天然产物复配物抑制4T1细胞生长与增殖的重要途径。各组天然产物的复配物可影响4T1细胞内NO的释放水平,对NO释放水平的影响可能会促进4T1细胞凋亡、抑制4T1细胞生长。