茄科蔬菜立枯丝核菌的遗传分化及分子检测

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2005-2006年,从山东泰安、寿光及陕西周至、太白等地采集辣椒和番茄立枯病、茎腐病和根腐病病株及病株周围土壤标本65份,分离、纯化得到39个立枯丝核菌菌株。菌丝融合群鉴定和5.8S rDNA-ITS区序列分析结果表明:36个菌株(占菌株总数的92.3%)属于立枯丝核菌的AG-4融合群,仅有3个菌株属于AG-5融合群(占分离菌株总数的7.7%);隶属AG-4融合群的菌株又进一步分为AG-4-HG-I和AG-4-HG-III融合亚群,隶属此两个亚群的供试菌株与此两个亚群的标准菌株相比,其5.8S rDNA-ITS区序列一致性达99%-100%。本研究还进一步证明AG-4-HG-I群的菌株为茄科蔬菜根部病害的优势致病群,占分离菌株总数的79.5%;AG-4-HG-III群菌株占分离菌株总数的12.8%,居分离菌株总数的第二位。此亚群为国内首次在茄科蔬菜上分离得到。利用10个随机引物,对21个代表菌株进行RAPD分析,结果表明,10个引物共获得179个DNA多态性片段,多态性检测率为100%;以遗传距离0.43为阈值时,将供试的21个菌株分为2个RAPD组,以遗传距离0.34为阈值时,属于AG-4融合群的菌株又可以分为2个RAPD组;隶属同一融合亚群的不同菌株间也存在丰富的遗传分化。说明RAPD分析结果能够反映茄科蔬菜丝核菌不同菌株间丰富的遗传分化现象。利用番茄对分离得到的39个丝核菌菌株进行了致病性测定,结果表明:隶属不同融合群的不同菌株其致病性强弱存在明显差异。同属于AG-4融合群的36个菌株也具有明显的致病力分化现象。总体看来,属于AG-4-HG-I融合亚群的菌株致病力较强,属于AG-4-HG-III融合亚群的菌株的致病力相对较弱。将AG-4-HG-I融合亚群各供试菌株的致病力分化结果与RAPD分析结果进行对比分析发现,菌株的RAPD分组(RG)与致病性分组(VG)无明显相关性。由此可见,RAPD分析虽然能够比较全面的反映供试立枯丝核菌菌株间的遗传分化,但是,对于探寻菌株间致病力的分化并不是一个有效手段。依据供试菌株rDNA-ITS区序列分析结果,针对AG-4融合群设计一对特异性引物,该引物特异性检测结果表明,只有属于AG-4融合群的丝核菌菌株扩增到一个约500bp的片段,属于其它融合群的丝核菌菌株及其它土传真菌病原如茄腐镰刀菌和终极腐霉菌都没有扩增到任何片段;利用该对引物从番茄立枯病罹病植株的发病部位成功检测到一个约500bp的片段,而从健康植株中没有检测到任何片段。此特异性引物为茄科蔬菜丝核菌病害的早期、快速诊断奠定了良好的基础。
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