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本论文是以具有重要药理活性的核苷类物质为主线进行课题的研究。应用LC-ESI/MS法分析金线莲中的核苷类物质;建立了一种以正丁醇-甲醇-水为溶剂系统的高速逆流色谱方法分离纯化猴头菇中核苷类物质腺苷。本研究为中药材中核苷类物质的开发应用提供技术支持。
论文共分为3章:
1、LC-MS法分析野生、种植和组培3种金线莲全草中的核苷类物质
采用HPLC-ESI/MS法对野生、种植和组培三种金线莲中的核苷类10种成分进行分析,色谱条件为:C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:A-20mmol/L乙酸铵水溶液,B-甲醇;流速:1.0ml/min;检测波长:260nm;柱温:30℃;进样量:20μl。结果表明南靖组培、永安种植、野生这三种金线莲药材中均含有胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷和腺苷,三者中核苷类成分的总含量分别为2.2013mg/g、1.8568mg/g和1.6639mg/g。经Friedman检验,显著性P值大于0.05,尚不能认为野生、种植、组培三种生长方式的金线莲药材中的核苷类成分的含量存在显著不同。
2、不同种植时间金线莲全草以及不同来源金线莲叶子和根茎中核苷类物质的研究
采用HPLC-ESI/MS法对3月龄、6月龄、8月龄的金线莲全草以及6种来源金线莲叶子和根茎中核苷类物质的含量进行分析,色谱条件为:C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:A-10mmol/L乙酸铵/0.5%乙酸水溶液,B-甲醇,二元梯度洗脱;流速:1.0ml/min;检测波长:260nm;柱温:30℃;进样量:20μl。结果显示,本研究所用金线莲均含有胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、2-脱氧胞苷、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2-脱氧鸟苷、胸苷、腺苷和2-脱氧腺苷13个核苷类物质。3月龄、6月龄、8月龄金线莲全草中核苷类物质的总含量依次为1.819mg/g、1.549mg/g和1.487mg/g。经Friedman检验,显著性P值大于0.05,尚不能认为种植月龄分别为3个月、6个月、8个月的金线莲药材中的核苷类成分的含量存在显著不同。药材叶子和根茎中核苷类物质的含量差异采用配对样本t检验,结果显示尿嘧啶、2-脱氧胞苷、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、2-脱氧鸟苷、胸苷和2-脱氧腺苷的显著性P值大于0.05,差异无统计学意义。胞苷和腺苷的P值小于0.05,差异有统计学意义,可认为胞苷和腺苷在金线莲叶子和根茎中分布不同。
3、高速逆流色谱分离制备猴头菇中的核苷类物质
应用HSCCC分离制备猴头菇中的核苷,对两相溶剂系统的组成和HSCCC的分离参数进行优化,确定最适宜的溶剂系统为正丁醇-甲醇-水(6∶1∶9),流速为1.2ml/min,头-尾洗脱模式;转速为800rpm,柱温为40℃,检测器波长为254nm。采用水提醇沉法提取猴头菇中的核苷类成分,经高速逆流色谱分离纯化后得到Ⅲ单一成分,经UV、IR、MS、NMR结构鉴定,确定Ⅲ为腺苷。
论文共分为3章:
1、LC-MS法分析野生、种植和组培3种金线莲全草中的核苷类物质
采用HPLC-ESI/MS法对野生、种植和组培三种金线莲中的核苷类10种成分进行分析,色谱条件为:C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:A-20mmol/L乙酸铵水溶液,B-甲醇;流速:1.0ml/min;检测波长:260nm;柱温:30℃;进样量:20μl。结果表明南靖组培、永安种植、野生这三种金线莲药材中均含有胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、胸苷和腺苷,三者中核苷类成分的总含量分别为2.2013mg/g、1.8568mg/g和1.6639mg/g。经Friedman检验,显著性P值大于0.05,尚不能认为野生、种植、组培三种生长方式的金线莲药材中的核苷类成分的含量存在显著不同。
2、不同种植时间金线莲全草以及不同来源金线莲叶子和根茎中核苷类物质的研究
采用HPLC-ESI/MS法对3月龄、6月龄、8月龄的金线莲全草以及6种来源金线莲叶子和根茎中核苷类物质的含量进行分析,色谱条件为:C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:A-10mmol/L乙酸铵/0.5%乙酸水溶液,B-甲醇,二元梯度洗脱;流速:1.0ml/min;检测波长:260nm;柱温:30℃;进样量:20μl。结果显示,本研究所用金线莲均含有胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、2-脱氧胞苷、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2-脱氧鸟苷、胸苷、腺苷和2-脱氧腺苷13个核苷类物质。3月龄、6月龄、8月龄金线莲全草中核苷类物质的总含量依次为1.819mg/g、1.549mg/g和1.487mg/g。经Friedman检验,显著性P值大于0.05,尚不能认为种植月龄分别为3个月、6个月、8个月的金线莲药材中的核苷类成分的含量存在显著不同。药材叶子和根茎中核苷类物质的含量差异采用配对样本t检验,结果显示尿嘧啶、2-脱氧胞苷、尿苷、腺嘌呤、鸟苷、2-脱氧鸟苷、胸苷和2-脱氧腺苷的显著性P值大于0.05,差异无统计学意义。胞苷和腺苷的P值小于0.05,差异有统计学意义,可认为胞苷和腺苷在金线莲叶子和根茎中分布不同。
3、高速逆流色谱分离制备猴头菇中的核苷类物质
应用HSCCC分离制备猴头菇中的核苷,对两相溶剂系统的组成和HSCCC的分离参数进行优化,确定最适宜的溶剂系统为正丁醇-甲醇-水(6∶1∶9),流速为1.2ml/min,头-尾洗脱模式;转速为800rpm,柱温为40℃,检测器波长为254nm。采用水提醇沉法提取猴头菇中的核苷类成分,经高速逆流色谱分离纯化后得到Ⅲ单一成分,经UV、IR、MS、NMR结构鉴定,确定Ⅲ为腺苷。