【摘 要】
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黄花菜是一种广泛分布于我国南北地区的经济作物,兼具食药价值。据研究资料表明:黄花菜中含有多种黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎和降血糖等作用,已广泛被用于食品、制药和化妆品等领域。宁夏是全国黄花菜五大主产地之一,目前种植黄花菜面积达17万亩,得天独厚的地理环境使得宁夏黄花菜质优量大,属宁夏特色农产品之一,已成为当地扶贫攻坚的支柱产业。本文以宁夏、陕西、甘肃、湖南主要产区黄花菜为研究对象,以人肝癌细胞(
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黄花菜是一种广泛分布于我国南北地区的经济作物,兼具食药价值。据研究资料表明:黄花菜中含有多种黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎和降血糖等作用,已广泛被用于食品、制药和化妆品等领域。宁夏是全国黄花菜五大主产地之一,目前种植黄花菜面积达17万亩,得天独厚的地理环境使得宁夏黄花菜质优量大,属宁夏特色农产品之一,已成为当地扶贫攻坚的支柱产业。本文以宁夏、陕西、甘肃、湖南主要产区黄花菜为研究对象,以人肝癌细胞(HepG2)为模型对象,开展了不同产地黄花菜总黄酮含量测定、结构表征、组成成分分析和抗氧化研究,为宁夏黄花菜产业技术升级提供相关科学依据。主要研究内容如下:(1)通过超声辅助提取黄花菜总黄酮,响应面法优化提取工艺。实验结果表明:最佳提取工艺参数为乙醇浓度为80%、液料比15:1、提取时间60 min、超声功率300 W、提取温度40℃,在此条件下,宁夏产地黄花菜总黄酮含量最高,为11.82±0.09 mg/g,其次是陕西和甘肃产地黄花菜总黄酮含量,分别为11.42±0.02和10.81±0.06 mg/g,湖南产地黄花菜总黄酮含量最低,为 10.34±0.07 mg/g。(2)不同产地黄花菜总黄酮结构表征及组成成分分析。采用电子扫描电镜(SEM)对不同产地黄花菜提取物进行表观结构分析,结果表明不同产地黄花菜提取物无显著差异;采用傅立叶变换红外光谱(FT-IR)对不同产地黄花菜提取物的特征官能团进行分析,进而确定不同产地黄花菜提取物中相同成分为黄酮类物质;采用液质联用(LC-MS)技术对不同产地黄花菜总黄酮进行定性定量分析,宁夏产地黄花菜中芦丁、柚皮素、紫云英苷、金丝桃苷、槲皮苷、番石榴苷、槲皮素和香蒲新苷的含量最高,而陕西产地黄花菜中山奈酚和木犀草素含量最高。(3)不同产地黄花菜总黄酮体外抗氧化活性测定。实验结果表明:随着黄花菜总黄酮浓度的增加,四个产地黄花菜总黄酮对DPPH、ABTS、·OH和铁还原力的清除活性呈剂量依赖性。在相同浓度下,宁夏产地黄花菜总黄酮对DPPH自由基和·OH自由基清除能力最强,其次是陕西和湖南产地黄花菜总黄酮清除效果,甘肃产地黄花菜总黄酮清除能力最低;宁夏与陕西产地黄花菜总黄酮的铁还原力和对ABTS自由基的清除力强于甘肃产地与湖南产地。(4)不同产地黄花菜总黄酮对HepG2细胞氧化应激损伤影响研究。通过测定细胞内活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)水平、抗氧化酶(SOD、CAT、GPX)含量、还原性谷胱甘肽(GSH)含量、还原性谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG),探究黄花菜总黄酮对HepG2细胞氧化应激损伤的影响;采用实时荧光定量PCR技术对抗氧化相关基因SOD1进行定量分析。实验结果表明:四个产地黄花菜总黄酮均显著降低了 H2O2诱导细胞内ROS含量和MDA含量,增加了 GSH含量,GSH/GSSG的比值增大,使抗氧化酶活力水平显著提高,导致SOD1等抗氧化基因的表达上调,说明四个产地黄花菜总黄酮对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有保护作用,其中宁夏产地黄花菜总黄酮处理组中SOD1等抗氧化基因的表达量最高,进一步验证黄花菜总黄酮对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。
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