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目的：通过大肠杆菌原核表达系统,由包涵体经纯化复性后获取重组人干细胞因子(recombinant human stem cell factor, rhSCF)蛋白,同时制备相应的单克隆抗体,以新鲜脐血中分离的单核细胞(mononuclear cell, MNC)对SCF及其单抗的活性进行检测。方法：通过大肠杆菌表达系统,经IPTG诱导表达获取SCF包涵体,经透析复性,CM-Sepharose纯化后获得蛋白。用Ficoll密度梯度离心法从脐带血中提取MNC,利用免疫磁珠分选法(magnetic cell sorting, MACS)分选其中具有CD34+抗原表位的细胞,根据之前实验结果,使用一定浓度的血小板生成素(thrombopoietin、FLT-3配体(FLT-3ligand, FL)及实验获取的重组人干细胞因子(rhSCF)组合对脐带血进行七天体外扩增以检测rhSCF生物活性。制备筛选得到高滴度单克隆细胞株,使用该单克隆抗体通过脐带血体外扩增观察该单抗对rhSCF生物活性的抑制作用。培养七天后通过流式细胞术检测CD34+阳性细胞比例。使用肽图分析对rhSCF进行结构和功能研究。结果：成功使用IPTG在大肠杆菌BL21诱导表达rhSCF蛋白,包涵体经复性及CM-Sepharose纯化获得高纯度的rhSCF蛋白。筛选获得高滴度的rhSCF单克隆抗体细胞株23C8。干细胞体外扩增实验表明rhSCF蛋白FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用；单克隆抗体23C8可以特异性的抑制rhSCF促进干细胞体外扩增的生物活性。肽图分析结果表明,rhSCF的活性位点位于第93-165位氨基酸序列中。结论：成功建立rhSCF原核表达、复性和纯化体系。rhSCF蛋白具有良好生物学活性,与同类标准品相比无明显差异；获得可分泌高滴度单克隆抗体的23C8单克隆细胞株；实验表明单克隆抗体23C8的结构域可结合rhSCF的生物活性位点,能特异性抑制rhSCF的活性,阻止CD34+细胞体外扩增。rhSCF同MAb结合的活性位点位于第93-165位氨基酸序列中。该课题为造血干／祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础。同时为该细胞因子的临床应用提供了有价值的参考。