弓形虫为寄生于细胞内的原虫,它感染所有的恒温动物,包括人类,是寄生于人体最普遍的寄生虫之一,全球约有三分之一的人口感染弓形虫。弓形虫感染在先天感染和免疫系统受损的个体中有高发病率和高死亡率。先天感染可导致流产、新生儿畸形或胎儿出生后导致其他缺陷,如失明和严重的认知缺陷等。在免疫系统受损的个体中,感染寄生虫可导致脑炎和神经损伤。除此之外,食用感染弓形虫包囊动物的肉,是人体感染弓形虫的一个主要途径。棒状体蛋白18(ROP18)为弓形虫棒状体蛋白,当弓形虫进入宿主细胞时,会生成一层保护膜包裹自身,使自己受细胞环境影响而不被杀死,ROP18的作用则是让宿主细胞某些蛋白失效而无法破坏这层保护膜。其作用机制是通过和宿主细胞中一类与免疫有关的鸟苷酸酶(GTPase)相结合,使得后者失效,进而无法破坏弓形虫周围的保护膜。AMA1为弓形虫顶端膜抗原,是一种微线体蛋白,为I型膜蛋白,分泌于弓形虫表面,在所有复顶亚门寄生虫中高度保守。有实验表明,AMAl在弓形虫入侵宿主细胞的过程中起重要作用,AMA1缺失将使弓形虫无法进入宿主细胞。pBudCE4.1表达载体可同时表达哺乳动物细胞系的两个基因,并可同时独立表达两个重组蛋白,可在多种类型哺乳动物细胞中高效稳定的表达。本研究根据已发表的AMA1mRNA序列和ROP18DNA序列,设计合成引物,构建真核表达质粒pBudCE4.1-AMA1、pBudCE4.1-ROP18,然后构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18真核重组质粒。然后转染人包皮成纤维细胞(HFF),48-72小时后,提取细胞RNA,通过SDS-PAGE及逆转录鉴定其表达情况,证实重组质粒在HFF细胞中正常表达。此后,通过肌肉注射重组质粒免疫BALB/c小鼠,设立PBS对照组及空载体对照组,于第15天和第30天加强免疫,并在免疫前取血,收集血清；在第56天时进行攻击实验。将收集的血清进行免疫学检测,检测结果表明重组表达载体诱发宿主的免疫应答反应效果良好。通过攻击感染实验的验证,证明重组DNA疫苗对小鼠均具有一定的免疫保护作用,而且,重组质粒基因疫苗的免疫效果远远比单基因疫苗的免疫效果高,这对今后进一步研制弓形虫基因疫苗奠定了坚实的实验基础。