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研究过量碘化钾(potassium iodide, KI)对Fisher大鼠甲状腺细胞(Fisher rat thyroid cell line, FRTL)线粒体超氧化物生成、细胞活力及细胞凋亡的影响,探讨碘过量对FRTL细胞过氧化损伤的发生、发展过程和机制,并用促甲状腺激素(thyrotropin, TSH)或丙基硫氧嘧啶(propylthiouracil, PTU)进行干预,研究其对碘过量导致的FRTL细胞过氧化损伤的影响。1.应用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法检测不同浓度(10-7mol/L～10-2mol/L) KI对FRTL细胞活力的影响,相应浓度氯化钾(potassium chloride, KCl)作为渗透压对照。2.分别用10-4 mol/L、10-2mol/L KI处理2h、4h、24h,利用MitoSOX通过流式细胞术和荧光显微镜检测FRTL细胞线粒体超氧化物生成,利用免疫细胞化学法和酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测FRTL细胞内细胞色素C(cytochrome c, cyt c)释放,利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)测定试剂盒检测细胞培养液上清的LDH活力,利用碘化丙啶(propidium iodide, PI)通过流式细胞术检测死亡细胞百分比(percent of dead cells),DNA琼脂糖电泳检测DNA断裂片段,透射电镜观察超微结构改变。3.用10"4mol/LKI加或不加10U/L TSH处理24h,检测FRTL细胞线粒体超氧化物生成和细胞活力。4.用10-4mol/LKI加或不加300μmol/L PTU处理2h、24h,检测FRTL细胞线粒体超氧化物生成和细胞活力。1.处理30min,10-7～10-2mol/LKI或KCl不影响FRTL细胞活力(p>0.05)；处理24h,10-5～10-2mol/LKI明显降低FRTL细胞活力(p<0.05),10-7～10-2 mol/LKCl不影响细胞活力(p>0.05)。2.碘过量对FRTL细胞过氧化损伤的时效性(1)处理2h、4h、24h,FRTL细胞内超氧化物生成增加,以2h增加最明显。(2)处理2h、4h、24h,cyt c释放增加(p<0.01),4h最明显。(3)处理4h、24h,培养液上清LDH活力明显增加(p<0.01),死亡细胞百分比升高。(4)处理24h,出现DNA ladder。(5)电镜下处理2h,线粒体肿胀,4h细胞膜、线粒体膜溶解、内质网扩张、髓磷体形成,24h凋亡小体出现。3. TSH或PTU对碘过量导致的FRTL细胞过氧化损伤的影响(1)处理24h,KI+TSH组线粒体超氧化物生成明显低于KI组(p<0.05),细胞活力明显高于KI组(p<0.05)。(2)处理2h,KI+PTU组线粒体超氧化物生成明显低于KI组(p<0.01),处理24h,KI+PTU组细胞活力明显高于KI组(p<0.05)。1.KI对FRTL细胞活力的影响具有浓度依赖性。2.碘过量对FRTL细胞过氧化损伤具有时效性,2h导致线粒体氧化损伤,伴有cyt c释放,4h细胞膜受损,线粒体膜溶解,24h细胞损伤进一步加重,并出现细胞凋亡。3. TSH(10U/L)在一定程度上可以减轻碘过量对FRTL细胞的过氧化损伤。4.PTU可以减轻碘过量对FRTL细胞过氧化损伤。