【摘 要】
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本研究通过利用实验室现有材料青霉菌株HP7-1及其高产纤维素酶诱变突变株EU2106,在Avicel纤维素酶诱导表达培养基条件下分别培养两种菌株的分生孢子并提取菌丝总RNA。利用深
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本研究通过利用实验室现有材料青霉菌株HP7-1及其高产纤维素酶诱变突变株EU2106,在Avicel纤维素酶诱导表达培养基条件下分别培养两种菌株的分生孢子并提取菌丝总RNA。利用深圳华大生物技术公司的测序服务进行转录组测序分析。结果表明各类CBH、EG的基因的转录水平均提高三倍左右,这与DNS法测定的相应酶活力提升水平是一致的。一方面验证了纤维素酶类在转录水平的提升是导致实际酶活力提高的直接原因,另一方面测序结果表明野生型和突变体菌株的纤维素酶类编码基因和重要的纤维素酶表达调控基因cre1、ace1、hap2/3/5以及xyr1的编码核苷酸序列一致,而在表达丰度都有不同程度差异,其中唯一表达上调的正向调控转录因子xyr1对纤维素酶活的提高起到最主要作用。最后通过GO功能分类分析比较差异在2倍以上的表达差异基(DEG),发现Unigene8063_All是一个很重要的调控因子。它在突变体中的表达丰度下调为野生型的一半,Unigene8063_All编码的蛋白比对结果是一种叫FlbD的分生孢子发育蛋白,具有DNA结合结构域,是属于myb家族的一种转录因子。在构巢曲霉(Aspergillus nidulans)等丝状真菌中的研究表明FlbD主要是通过与FlbB等调控因子一同结合在brlA启动子区域促进brlA的表达而导致丝状真菌细胞的发育和分化。但是FlbB和brlA的表达水平在两株青霉中却没有明显差异。导致突变株纤维素酶活升高的根本原因还不清楚,有待进一步分析。
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