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研究目的:内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的主要起始因素之一,与AS的高发病率和高死亡率密切相关。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)通过激活动脉内膜中的内皮细胞,上调趋化因子和炎症因子的表达,加速内皮细胞炎症反应和AS的发展。β2糖蛋白I(β-2-glycoprotein I,β2GPI)作为自身免疫性疾病抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome,APS)的关键抗原,与oxLDL结合形成oxLDL/β2GPI复合物,参与AS的病理进程。本课题组前期研究表明,Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体(anti-β2GPI)复合物加速小鼠腹腔巨噬细胞泡沫化中发挥重要作用。然而,oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物在AS早期对内皮细胞的影响尚未清楚。在前期工作及相关报道的基础上,本文进一步探讨oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物在人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)表达AS相关炎症因子中的作用,以及TLR4/NF-κB的影响。研究方法:(1)利用划痕实验(Scratch test)观察经oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/anti-β2GPI复合物、oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物、脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)处理后HUVEC的迁移能力,Image J软件定量分析细胞迁移距离。(2)实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-q PCR)和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测经oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/anti-β2GPI复合物、oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物、LPS处理后,MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA和蛋白水平。(3)RT-q PCR和Western blot分别检测经上述刺激物处理后HUVEC中TLR4的m RNA和蛋白表达。(4)RT-q PCR和ELISA分别检测经TAK-242或PDTC预处理和未经处理的HUVEC,观察TLR4/NF-κB在上述刺激物诱导MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α表达中的作用。研究结果:(1)经oxLDL(40μg/m L)/β2GPI(100μg/m L)/anti-β2GPI(100μg/m L)复合物处理后,HUVEC的迁移距离增加,与media相比差异显著(p<0.05)。(2)经oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物处理后,MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α的m RNA和蛋白水平增加,与media相比差异显著(p<0.05)。(3)经oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物处理后,TLR4的m RNA和蛋白水平增加,与media相比差异显著(p<0.05)。(4)经TAK-242或PDTC预处理HUVEC,oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物组MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达被有效抑制(p<0.05),但TAK-242的抑制效果更强。结论:(1)与media相比,oxLDL、oxLDL/β2GPI、oxLDL/anti-β2GPI、oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI、LPS均能促进HUVEC迁移和炎症因子MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α表达,但oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物组HUVEC迁移最明显,炎症因子表达最高,提示oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物在HUVEC炎症反应中发挥显著作用。(2)oxLDL/β2GPI/anti-β2GPI复合物诱导HUVEC炎症反应中TLR4高表达,分别抑制TLR4和NF-κB,能够降低刺激组炎症因子的表达,TLR4抑制剂作用强于NF-κB抑制剂,提示TLR4/NF-κB介导HUVEC炎症因子的表达,TLR4在其中发挥主要作用,降低TLR4水平有利于预防APS伴发AS。