东亚三角涡虫是扁形动物门的代表动物，首次出现了两侧对称和中胚层，具有极强的再生能力，已经成为研究动物进化、胚胎发育及再生的重要模式动物。p53基因作为著名的抑癌基因，在维持基因组稳定性的方面发挥着重要作用，P53还是一种序列特异性转录因子，含有两个反式结构域，当细胞受到刺激，如DNA损伤、缺氧、营养匮乏等，可以通过靶基因内部或上游的P53反应元件结合反式结构域，激活靶基因的转录，从而调控DNA损伤修复、细胞增殖、衰老和凋亡等细胞进程。本研究从东亚三角涡虫(Dugesia japonica)cDNA文库中，获得了具有完整编码框的p53基因，利用Northern杂交、整体原位杂交、RT-PCR等分子生物学手段来研究涡虫不同时期Djp53基因的表达情况，以期了解涡虫Djp53基因在胚胎发育、涡虫成虫和再生过程中的功能；并构建了L4440-Djp53干扰载体，以推测Djp53基因在涡虫不同时期可能承担的生物学功能；并在体外合成Djp53、Dj14-3-3和DjRhoA的双链RNA，分别注射涡虫，提取总RNA，利用Realtime-PCR检测Djp53、Dj144-3-3、DjRhoA及DjMLC的相对表达量变化，推测它们之间的相互关系。　　从东亚三角涡虫cDNA文库中获得编号为K228的cDNA克隆，序列经NCBI BLASTP程序比对，利用InterProScan和Motif Scan预测蛋白结构，发现具有转录激活区、特异性DNA结合域、核定位信号肽等P53的保守域，因此命名为Djp53基因，全长909 bp，最大开放阅读框为849bp，编码283个氨基酸组成的蛋白质。　　利用整体原位杂交检测Djp53基因在东亚三角涡虫胚胎发育过程的表达情况表明在胚胎发育早期，没有检测到Djp53信号，Djp53在胚胎咽形成的第三阶段开始表达，信号出现在胚胎咽一侧，之后逐渐加强，主要集中在神经原基、神经索和咽，前端信号更强烈。在器官完全分化孵化成幼虫后，Djp53在涡虫从头到尾的实质组织中均匀表达。说明Djp53基因在涡虫胚胎发育过程中发挥着重要作用，早期与神经原基和神经索形成有关，当器官完全分化后与多功能干细胞(neoblasts)的维持有关。　　利用整体原位杂交和RT-PCR检测整体和再生的涡虫，发现再生过程中，Djp53在再生1、3、5天在胚基表达，且在第三天表达量最高，而再生7天、10天和成熟的涡虫与幼虫表达位置一致，在实质组织均匀表达，且表达较弱；RNA干扰后的RT-PCR检测显示，Djp53表达量显著下降，涡虫不能正常再生或出现眼点缺陷，Djp53仅在中枢神经系统表达。由此推断，东亚三角涡虫Djp53基因在早期胚基发育阶段，通过调节多功能干细胞(neoblasts)的迁移和增殖分化影响早期胚基的形成，是涡虫早期胚基发育必不可少的一个基因，并且在涡虫成体和再生后期对多功能干细胞(neoblasts)的维持具有重要的作用。　　为了研究相关信号通路，合成Djp53、Dj14-3-3、DjRhoA双链RNA，分别注射涡虫，提取总RNA，利用Realtime-PCR检测特异基因干扰后其他基因表达量变化情况，结果表明特异沉默Djp53基因后，而RhoA和14-3-3的相对表达量分别增加了119％和120％，DjMLC只增加了14％；特异沉默DjRhoA基因后，Djp53和Dj14-3-3的相对表达量分别增加了110％和960%，DjMLC增加了32％；特异沉默Dj14-3-3基因后，DjRhoA、DjMLC和Djp53相对表达量分别降低了26％、29％和40％，说明p53、14-3-3、RhoA及MLC在涡虫中存在相互关系。