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研究背景和目的:胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤,在中国胃癌的发病率与死亡率排列在所有肿瘤前列。虽然手术治疗为胃癌主要的治疗手段,但化学治疗同样在胃癌治疗中发挥着非常重要的作用。然而,化疗易使胃癌产生耐药性并且其常产生毒副作用,导致胃癌的治疗效果及预后不尽人意。因此,探究胃癌的新的治疗方式存在着极大的意义。目前,用于化疗的药物主要是通过损伤肿瘤细胞DNA进而诱导其凋亡而发挥作用的。研究表明,在胃癌细胞中端粒重复序列结合因子2(Telomeric repeat binding protein 2,TRF2)表达水平异常升高,并且最新研究发现,TRF2不仅具有端粒保护相关功能,同时还能作为DNA损伤修复因子参与DNA损伤修复反应从而促进肿瘤细胞的存活。为了进一步探究TRF2在胃癌细胞中的作用,本研究通过抑制TRF2的表达探究其对胃癌细胞发生发展的影响,并进一步探究其分子机制。研究方法:构建PLKO.1-sh TRF2慢病毒载体感染人胃癌细胞系BGC-823稳定敲低TRF2的表达。通过荧光原位杂交(FISH)、免疫荧光-荧光原位杂交(IF-FISH)的技术检测敲低TRF2基因表达是否能导致端粒DNA的损伤反应从而引发端粒功能障碍损伤灶(TIF)以及是否导致染色体畸变(端粒末端信号异常)。通过划痕实验、克隆形成实验、CCK8实验、流式细胞术、台盼蓝排斥实验检测敲低TRF2对人胃癌细胞系BGC-823的增殖、迁移以及存活能力的影响。通过Western Blot以及实时荧光定量PCR(q PCR)技术检测自噬(Autophagy)相关蛋白(LC3I/II,P62,ATG5)以及铁死亡(Ferroptosis)相关蛋白(SLC7A11,GPX4)是否发生变化。最后,用自噬以及铁死亡抑制剂处理敲低TRF2的胃癌细胞BGC-823,观察抑制剂对胃癌细胞迁移、增殖以及存活能力的影响。结果:成功构建sh RNA慢病毒表达载体并敲低人胃癌细胞系BGC-823 TRF2表达。FISH和IF-FISH结果显示:敲低TRF2能够导致明显的端粒DNA损伤以及端粒末端信号异常。划痕实验、克隆形成实验、CCK8实验、流式细胞术、台盼蓝排斥实验结果显:敲低TRF2导致人胃癌细胞系BGC-823的增殖能力、迁移能力以及存活能力明显下降。Western Blot以及实时荧光定量PCR结果显示:敲低TRF2可以增强人胃癌细胞系BGC-823的自噬水平以及使铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4表达降低。通过对比发现,用自噬以及铁死亡抑制剂处理的敲低TRF2的人胃癌细胞系BGC-823明显比敲低TRF2胃癌细胞系BGC-823的增殖能力、细胞活力、迁移能力以及存活能力强。结论:敲低人胃癌细胞系BGC-823 TRF2表达导致端粒功能障碍,并使胃癌细胞增殖能力、细胞活力、迁移能力以及存活能力下降。进一步,我们发现敲低TRF2对胃癌细胞的影响依赖于细胞的自噬与铁死亡。因此,我们分析,在胃癌细胞中TRF2高表达可能是维持胃癌细胞生存的一种保护机制。敲低胃癌细胞TRF2不仅能通过传统的ATM依赖的DNA损伤反应促进胃癌细胞凋亡,还能引起胃癌细胞自噬性细胞死亡和铁死亡。为胃癌发生发展的分子机制的研究以及治疗提供了新的思路。