膜—细胞骨架连接分子Ezrin及CD44v6对胃癌生长和转移的影响

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前言Ezrin属于ERM(Ezrin-Radixin-Moesin)家族成员之一,其编码基因位于染色体6q25-q26,ERM蛋白的C末端与细胞骨架的actin相连,N末端通过与细胞表面的粘附分子Cadherin,CD44等粘附因子相连,通过调节细胞-细胞,细胞-间质的粘附性来影响肿瘤的侵袭性。Ezrin蛋白首先在1981年在鸡的肠上皮绒毛中发现,它富含于含肌动蛋白的细胞绒毛和细胞膜的皱襞中并参与上皮细胞的膜动力学。Ezrin蛋白几乎存在于任何细胞中,在胃,小肠,肺,胰腺和肾组织有较高的表达。在脾,胸腺,淋巴结和骨髓中有中等表达。在心脏,睾丸和肌肉中有较低表达。在正常组织中Ezrin蛋白参与形成细胞表面结构的形成如伪足和绒毛等,并形成细胞与细胞,细胞与基质的粘附,细胞间信号的传导和细胞的运动。近年来的研究发现Ezrin基因的表达在肿瘤的发生,浸润和转移中也起到重要作用。检测正常胃粘膜,非典型增生,胃癌和转移淋巴结中Ezrin和CD44v6蛋白和基因表达,并分析其在不同病例中的表达的差异和联系。讨论Ezrin和CD44v6的蛋白和mRNA表达与胃癌浸润和转移的关系和意义。材料和方法收集中国医科大学附属盛京医院2008年10月-2009年6月手术切除胃癌标本84例(其中每例标本距离肿瘤边缘5厘米以上正常胃粘膜做对照)每个病例及对照均石蜡包埋,4微米连续切片,并行HE染色。免疫组织化学染色及结果判定:用S-P免疫组织化学方法检测正常胃粘膜组、胃癌组、转移淋巴结组中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的表达。鼠抗人Ezrin蛋白单克隆抗体(工作浓度1:300)购自SANDA公司,鼠抗人CD44v6单克隆抗体(工作浓度为1:200)购自北京博奥森生物技术有限公司。结果的判断方法,按照Birneretal报道的方法随即选择5个高倍镜视野(×400)每个视野计数200个细胞,共1000个细胞,阳性细胞少于或等于10%为阴性;无论其染色强度如何均记为0分;阳性细胞11-50%记为2分;阳性细胞51-80%记为3分;阳性细胞为>80%记为4分。根据显色分弱显色1分;中等为2分;高强度为3分,细胞阳性表达<10%(-),以上两组相加3分(+);4-5分(++);6-7分(+++)。RT-PCR荧光定量结果根据ΔCT=(实验组-内参组)-(对照组-内参组)值大小来判断胃癌组织中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白mRNA表达量。结果Ezrin蛋白表达在细胞浆中,胃癌组织中的阳性表达率为(84.5%);正常胃粘膜Ezrin蛋白阳性表达率为(61.9%);转移淋巴结Ezrin蛋白阳性表达率为(88%),病例组与对照组有统计学差异,P<0.05。在病例组的组织学分型中高分化胃癌Ezrin蛋白的阳性表达率为(93.8%);低分化胃癌中Ezrin蛋白的阳性表达率为(71.4%);两分型P<0.05,有差异。在病例组有淋巴结转移和无淋巴结转移及Bormann分型中的阳性表达的阳性率也有差异,P<0.05。CD44v6蛋白表达在细胞膜,胃癌组织中的阳性表达率为(75%);正常胃粘膜CD44v6蛋白阳性表达率为(51.2%);转移淋巴结CD44V6蛋白阳性表达率为(78%),病例组与对照组有统计学差异,P<0.05。在病例组的组织学分型中高分化胃癌CD44v6蛋白的阳性表达率为(81.6%);低分化胃癌中CD44v6蛋白的阳性表达率为(65.7%);两分型P<0.05,有差异。在病例组有淋巴结转移和无淋巴结转移中P<0.05。RT-PCR实验结果,荧光定量结果根据ΔCT=(实验组-内参组)-(对照组-内参组)值大小来判断胃癌组织中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的mRNA的表达量。结果显示胃癌组织中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白mRNA的表达明显高于正常胃粘膜的对照组。结论Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的表达在胃癌组中明显高于正常胃粘膜,提示Ezrin和CD44v6的表达可能参与了胃癌的生长过程。伴淋巴结转移胃癌组中Ezrin蛋白的表达明显高于无淋巴结转移组,提示Ezrin蛋白的表达可能参与了胃癌的转移过程。RT-PCR的实验结果定量的证明了在胃癌组中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的mRNA处于高表达状态,证明了前面的统计结果。
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