人脐带血造血干细胞的分离和体外扩增

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从人类新鲜脐带血(umbilical cord blood,UCB)中分离造血干细胞(hemopoietic stem cell,HSC);建立含有不同细胞因子的体外培养体系;将收集的UCB单个核细胞(MNC)在体外培养;掌握体外HSC的扩增方法;采用细胞活率计数法,形态学观察法,流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测UCB造血细胞表面标志分子变化法,掌握UCB造血干细胞的生长规律.为建立UCB血库和临床移植治疗一些成年人恶性病积累必要的实验数据.①体外人脐带血HSC培养结果显示,不同细胞因子组合会产生不同的扩增效果,细胞因子对单个核细胞的增殖与扩增有明显的促进作用.②不同细胞因子组合对细胞扩增的总数也有显著的差异性.SCF+IL-3+IL-6+TPO+FL对细胞总数扩增最多.各组之间对细胞数的扩增效果比较差异显著(p<0.01).③流式细胞仪(FCM)检测结果显示,CD34<+>造血干细胞在培养第14天达高峰,CD34<+>细胞扩增比较差异显著(P<0.01),之后逐渐下降.不同细胞因子组合的CD34<+>细胞扩增比较差异无显著性(P>0.05),有待进一步研究.④本实验结果表明UCB造血干细胞体外培养第14天,早期造血干细胞最多.提示,用UCB移植治疗临床成人恶性病的最佳时间为体外培养第14天.
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